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逆转录试剂中的RNase抑制剂作用是什么?

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2026-07-07

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说到逆转录试剂我们先来说说逆转录实验

什么是逆转录?

A:以RNA为模板,合成cDNA的过程。

 

 

逆转录实验需要哪些要素呢?

  • 模板
  • 引物
  • 逆转录酶
  • Buffer
  • dNTPs
  • RNA酶抑制剂
  • 无核酸酶水

关于模板,引物,逆转录酶,Buffer,dNTP这些,大家都非常明确,是作为反应过程中的要素而存在的,那RNA酶抑制剂是干什么用的呢?

  

RNA酶抑制剂的作用是与RNase以非共价键结合形成复合体,造成RNase失活,从而保护了我们的模板RNA,保证了RNA的稳定,反转录反应能顺利进行,把RNA完整地变成cDNA,全靠这个抑制剂在默默“挡刀”。它就是一个24小时贴身护卫,紧紧跟在RNA身边。

但是Rnase抑制剂也会有所不同,不同的试剂盒效果不同,不能说的秘密就在于这个RNA酶抑制剂的品种。

 

传统的RNase抑制剂有个常见的弱点--它们在工作温度上很挑剔,一般在50°C左右就开始“撂挑子”,变性失活了。

而现在很多反转录实验使用的是三代逆转录酶,反应温度往往设在50°C以上,甚至有些特殊模板需要55°C。温度一高,RNA酶抑制剂活性丧失,导致RNA不稳定,结果长片段的RNA被降解,你的qPCR Ct值偏高,或者长片段扩增不出来。

  

现在做得比较好的试剂盒,会用上耐热的RNase抑制剂。这种抑制剂经过了进化,哪怕在55°C甚至更高的温度下,依然能牢牢抱住RNase不松手。全程保护RNA,反转录效率自然就高,数据也更稳定。例如我们的新品11155ES逆转录试剂盒,使用了耐热型的RNA酶抑制剂,搭配升级版的Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)plus),性能更加出色。

产品性能

  • 高灵敏度

 

▲针对不同投入量的RNA,表现出更高的灵敏度。将293T细胞RNA和拟南芥RNA连续梯度稀释,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续使用染料法qPCR进行qPCR。Delta CT 值 (△CT = CT (各反转录产品) – CT (11155ES))表明,相比于其他反转录试剂,11155ES在不同RNA投入下多表现更佳。

  • 稳健保障

 

▲针对降解的RNA,有出色的能力保障合成。使用不同程度降解的293T细胞RNA进行cDNA合成,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续使用染料法qPCR进行qPCR。Delta CT 值 (△CT = CT (各反转录产品) – CT (11155ES))表明,相比于其他反转录试剂,11155ES可获得更高的cDNA得率和更低的CT值。

 

 

 

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