您好,欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
400-6111-883
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit(gDNA digester plus)
产品货号:11121ES60
产品规格:100 T
产品价格:¥ 935.00
类别:逆转录试剂盒

说明书下载

  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

    11121ES60

    100 T

    935.00

    748.00

     

    产品描述

     

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair®  Reverse Transcriptase而开发。该酶热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。

    该试剂盒包含gDNA digester,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6 和oligo (dT)18,用户可根据需要,选择Random Primers N6,Oligo (dT)18Gene Specific Primers作为逆转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

     

    产品组分

     

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    11121ES60 (100 T)

    11121-A

    RNase-free H2O

    2×1 mL

    11121-B

    5×gDNA digester Buffer

    200 μL

    11121-C

    gDNA digester

    100 μL

    11121-D

    5×Hifair® Ⅱ Buffer plus

    400 μL

    11121-E

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    200 μL

    11121-F

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    100 μL

    11121-G

    Random Primers N6 (50 μM)

    100 μL

    】:1)5×Hifair® Ⅱ Buffer plus包含gDNA digester抑制剂和dNTP

    2)Hifair® Ⅱ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。

     

    运输和保存方法

     

    干冰运输。-20℃保存,有效期18个月。

     

    注意事项

     

    1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染。

    2)建议RNA是溶于水而不是TE中,因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。

    3)可以不经过基因组去除步骤,直接进行逆转录,这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Cat#11119)效果一致。但是请勿将gDNA digester与11119ES中的5×Hifair® Ⅱ Buffer配套使用,因其不含终止gDNA去除反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    5)本产品仅作科研用途!

     

    关于逆转录引物的选择

     

    1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。
    2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
    3)Random Primers N6适用性较广,适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。

    4)使用Random primers N6,进行2 kb以下的cDNA合成时,Random primers N6的使用量为 1-2 μL2 kb 以上的cDNA合成时,Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。

     

    第一链cDNA合成操作步骤

     

    一、若实验需要去除残留基因组DNA

    1. 在RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 10 μL

    5× gDNA digester Buffer

    2 μL

    gDNA digester

    1 μL

    Total RNA

    1 ng -5 μg*

    or mRNA

    1 ng-500 ng*

    【注】:* 若后续实验为qPCR,Total RNA投入量为1 ng -1 μgmRNA的投入量为1 ng-100 ng。若基因的表达丰度很低,最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 20 μL

    上一步的反应液

    10 μL

    5× Hifair® Ⅱ Buffer plus

    2 μL*

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    Random Primers N6 (50 μM)  

    1 μL

    or Oligo (dT)18 (50 μM)

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    or 1 μL

    or 1 μL

    】:1)逆转录引物:荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。

    2)5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量*):因gDNA digester buffer的影响,本体系中只需要加2 μL。

        3)建议先加入5×Hifair® Ⅱ Buffer plus混匀后再添加反转录引物,以保证完全抑制gDNA digester的活性。

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25

    5 min

    42

    30 min

    85

    5 min

    】:逆转录温度:推荐使用42。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

    4. 逆转录产物可以-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

    二、若实验无需去除基因组DNA

    1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 20 μL

    Total RNA

    1 ng -5 μg

    or mRNA

    1 ng-500 ng

    5× Hifair® Ⅱ Buffer plus

    4 μL*

    Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    】:1)逆转录引物:荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。

    2)5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量*):因无gDNA digester buffer的影响,本体系中需要添加4 μL。

    【可选步骤】:针对复杂模板,建议RNA、H2O、反转录引物在65保温5 min后,冰上迅速冷却。然后再加入反转录酶和Buffer。

    2. 逆转录程序设置参照上述基因组去除后的逆转录程序。

     

    HB220607