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400-6111-883
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400-6111-883
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号:11119ES60
产品规格:100 T
产品价格:¥ 755.00
类别:逆转录试剂盒

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

    11119ES60

    100 T

    -20℃

    755.00


    产品描述

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。
    试剂盒中包含由总
    RNA或mRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6和oligo (dT)
    18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11119ES60 (100 T)

    11119-A

    RNase-free H2O

    2×1 mL

    11119-B

    5×Hifair® Ⅱ Buffer

    400 μL

    11119-C

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    200 μL

    11119-D

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    100 μL

    11119-E

    Random Primers N6 (50 μM)

    100 μL

    】:1)5×Hifair® Ⅱ Buffer中包含dNTP。2)Hifair® Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。


    运输和保存方法


    冰袋运输。
    -20℃保存。


    注意事项


    1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

    2)  为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作
    3)本产品仅作科研用途!


    第一链cDNA合成操作步骤

    1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 20 μL

    Total RNA

    1 ng -5 μg* 

    or mRNA

    1 ng-500 ng*

    5×Hifair® Ⅱ Buffer

    4 μL

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    or Oligo (dT)18 (50 μM)

    or 1 μL

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    or 1 μL

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    可省略】:若后续实验为PCR,针对复杂模板可将RNA、H2O、反转录引物在65孵育5 min 后,迅速冰上冷却,然后再加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix;若后续实验为qPCR,则可省略65孵育步骤,直接在体系中加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    】:* 若后续实验为qPCR,建议Total RNA  mRNA投入量不超过1 μg或100 ng,如果目的基因的表达丰度非常低,最多可投入5 μg Total RNA500 ng mRNA。

    2. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25℃

    5 min

    42℃

    30 min

    85℃

    5 min

    【注】:
    1)荧光定量实验可以只使用Random Primers N6;也可以1:1与Oligo (dT)18混合使用,效果更好。
    2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃。
    3)逆转录产物可以-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


    关于引物的选择

    1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。
    2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。

    3)Random Primers N6适用性较广,mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。

    4)使用Random primers N6,进行2 kb以下的cDNA合成时,Random primers N6的使用量为 1-2 μL2 kb 以上的cDNA合成时,Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。


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