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400-6111-883
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400-6111-883
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
产品货号:11139ES10
产品规格:10 T
产品价格:¥ 265.00
类别:逆转录试剂盒

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

    11139ES10

    10 T

    265.00

    Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

    11139ES60

    100 T

    1303.00


    产品描述


    Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair® III Reverse Transcriptase而开发。该酶cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® III Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可合成长达19.8 kb的cDNA。

    该试剂盒包含gDNA Digester Mix,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6和oligo (dT)18,用户可根据需要,选择Random Primers N6,Oligo (dT)18Gene Specific Primers作为逆转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。


    产品组分

    编号

    组分

    11139ES60 (100 T)

    11139-A

    RNase-free H2O

    2×1 mL

    11139-B

    5×gDNA Digester Mix

    300 μL

    11139-C

    10×Hifair® III Super Buffer1

    200 μL

    11139-D

    Hifair® III RT Enzyme Mix2

    100 μL

    11139-E

    Random Primers N6 (50 μM )

    100 μL

    11139-F

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    100 μL

    1) 10×Hifair® III Super Buffer 包含gDNA digester抑制剂和dNTPs。

       2) Hifair® III RT Enzyme Mix 包含RNase inhibitor。


    运输和保存方法


    冰袋运输。
    -20℃保存,有效期18个月。


    注意
    事项

    1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染。

    2)建议RNA是溶于水而不是TE中,因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。

    3)5×gDNA Digester Mix、10×Hifair® III Super Buffer、Hifair® III RT Enzyme Mix使用前请轻轻上下颠倒混匀,并小心离心至底部。吸取液体时请使用量程合适的移液器,枪头不要插入液面下过深。

    4)qPCR实验推荐基因组去除步骤,保证结果更加真实可靠
    5)本产品仅作科研用途!


    关于逆转录引物的选择

    1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。
    2)原核生物RNA的反转录请选用
    Random Primers N6或者基因特异性引物。

    3)Random Primers N6适用性较广,适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。


    第一链cDNA合成操作步骤

    一、若实验需要去除残留基因组DNA

    1. gDNA消化

    RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 15 μL

    5×gDNA Digester Mix

    3 μL

    Total RNA

    10 pg -5 μg* 

    or mRNA

    10 pg-500 ng*

    】:* 若后续实验为qPCR,Total RNA投入10 pg -1 μgmRNA的投入量为10 pg-100 ng。若基因的表达丰度很低,最多可投入5 ug Total RNA500 ng mRNA。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量(μL

    上一步的反应液

    15

    10×Hifair® III Super Buffer

    2

    Hifair® III RT Enzyme Mix

    1

    Random Primers N6 (50 μM)

    1

    or Oligo (dT)18 (50 μM)

    or 1

    or Gene Specific Primer (2 μM)

    or 1

    RNase-free H2O

    to 20

    【注】:1)逆转录引物:后续进行qPCR时,推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。

      2)建议先加入10×Hifair® III Super Buffer混匀后再添加逆转录引物,以保证完全抑制gDNA Digester的活性。

      3)体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25

    5 min

    551

    15 min2

    85

    5 min

    【注】:1)逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60℃。

       2)逆转录时间:后续进行qPCR时,推荐15 min;若后续用于PCR时,推荐30 min-60 min。

    4. 逆转录产物可以-20短期保存,若需长期保存,建议分装后,-80保存,避免反复冻融。

    二、若实验无需去除基因组DNA

    1. RNA模板变性

    RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。65℃孵育5 min,迅速置于冰上,并静置3 min。

    组分

    使用量

    RNase-free H2O

    To 17 μL

    Total RNA

    10 pg -5 μg

    or mRNA

    10 pg-500 ng

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    or Oligo (dT)18 (50 μM)

    1 μL

    or Gene Specific Primer (2 μM)

    or 1 μL

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    上一步的反应液

    17 μL

    10×Hifair® III Super Buffer

    2 μL

    Hifair® III RT Enzyme Mix

    1 μL

    【注】:体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。

    3. 参照上述程序进行后续上机实验。

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    产品名称

    货号

    规格

    Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 

    11119ES60

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