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Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
产品货号:11141ES10
产品规格:10T
产品价格:¥326.00
类别:逆转录预混液(for qPCR)

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  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

    11141ES10

    10 T

    326.00

    Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

    11141ES60

    100 T

    1383.00


    产品描述


    Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

    该预混液包含5×gDNA digester Mix和4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus。5×gDNA digester Mix可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus 含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase,RNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

    该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行特别优化,比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR®Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择Hieff UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。


    产品组分


    编号

    组分

    产品编号/规格

    11141ES10 (10 T)

    11141ES60 (100 T)

    11141-A

    RNase-free ddH2O

    1 mL

    2×1 mL

    11141-B

    5×gDNA digester Mix

    30 μL

    300 μL

    11141-C

    4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus

    50 μL

    500μL

    】:4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。 


    产品应用


    适用于两步法RT-qPCR。


    运输与保存方法


    冰袋运输。-20℃保存。有效期18个月。


    注意事项


    15×gDNA digester Mix4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打充分混匀后,准确吸取;

    2)如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL),请确保RNA是溶于水中而不是TE中,因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制;

    3)可以不经过基因组去除步骤,直接用4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus进行逆转录,这样所得到的结果会与使用Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11137ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester11137ES中的Hifair® Ⅲ SuperMix配套使用,因不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验
    4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

    5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    第一链cDNA合成操作步骤


    1. 残留基因组DNA去除

    在RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

    组分

    使用量

    RNase free ddH2O

    To 15 μL

    5×gDNA digester Mix

    3 μL

    模板RNA

    Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng 

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    在第1步的反应管中直接加入4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。

    组分

    使用量

    第1步的反应液

    15 μL

    4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus

    5 μL

    3.逆转录程序设置

    温度

    时间

    25℃

    5 min

    55℃

    15 min

    85℃

    5 min

    】:逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60℃。

    ※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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