荧光定量PCR案例|对虾肝肠胞虫定量PCR方法构建
样本&试剂&仪器平台
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样本来源 |
对虾 |
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试剂信息 |
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仪器信息 |
Roche Lightcycler 96 |
扩增片段CG含量&长度
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GC含量 |
36%~48%不等 |
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目标扩增长度 |
190bp~239bp不等 |
反应体系
以感染虾肝肠胞虫的对虾肝胰腺基因组为模板，取1 μL 20 mg/μL基因组进行定量。
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组分 |
体积 （μL） |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
5 |
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Forward Primer (10 μM)* |
0.2 |
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Reverse Primer (10 μM)* |
0.2 |
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模板DNA/cDNA** |
1 |
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无菌超纯水 |
Up to 10 |
反应程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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变性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
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退火/延伸 |
60℃ |
30 sec |
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熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
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扩增曲线&熔解曲线
扩增曲线梯度分明，熔解曲线峰单一尖锐。
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