Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix(茎环法)
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Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预混液,具有高灵敏度和高特异性的特点,同时,定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。核心组分Hieff® miRNA Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,再配以优化的Buffer,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。另外,预混液体系中添加了ROX Reference Dye,能够适用于不同qPCR仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可进行扩增。

产品特色
  • 灵敏度高:可达10pg
  • 特异性高:能区分同家族miRNA间单碱基差异
  • 重复性好:90孔复孔数据显示孔间误差小
  • 稳定性好:37℃稳定14天或冻融稳定50次或配置体系在25℃保留24h后,效果依旧稳定
应用案例
  • 灵敏度高,可达10 pg

图.以小鼠肝脏细胞的Total RNA为模板,用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)(Cat# 11139ES)进行反转录,获得的cDNA 以10倍梯度稀释(范围10pg /μL-0.1μg /μL),扩增鼠源的mmu-miR-125a、mmu-miR-132、mmu-miR-351基因。

  • 高特异性,能区分同家族miRNA间单碱基差异

图. 人类hsa-let-7家族拥有多条miRNA,彼此间相差的碱基很少,甚至只有单碱基的差异。以不同的引物,使用 Hieff® miRNA Universal  qPCR SYBR Master Mix(Cat# 11170ES)分别扩增这些miRNA,利用公式2^-△ct x 100%计算匹配率。

  • 重复性好

图.以人293T细胞的Total RNA为模板反转录,用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)(Cat# 11139ES)进行反转录,获得的cDNA稀释50倍,使用Hieff® miRNA Universal  qPCR SYBR Master Mix(Cat# 11170ES)进行90孔平行重复实验扩增人源的hsa-let-7a基因。

存储条件

冰袋运输。-20℃可避光保存,有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料 SYBR Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

FAQ

Q:如果要研究多个miRNA定量实验,每个miRNA是否均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A:是的,针对每个miRNA都要设计一条特异的茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA,内参也是这样做。

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COA
已发表文献

[1] Chen T, Lei S, Zeng Z, et al. MicroRNA‑137 suppresses the proliferation, migration and invasion of cholangiocarcinoma cells by targeting WNT2B. Int J Mol Med. 2020;45(3):886-896. doi:10.3892/ijmm.2020.4474(IF:4.101)

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