microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA，长度为22 nt左右，对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。本试剂盒采用SYBR® Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本产品中的2×Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂，含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适用于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
本产品必须与本公司的Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法）(Cat#11148ES)配套使用，以获得最终的实验结果。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 11171ES03 (20 μL×100 rxn) | 11171ES08 (20 μL×500 rxn) |
|---|---|---|---|
| 11171-A | 2×Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix | 1 mL | 5×1 mL |
| 11171-B | RNase-free H2O | 2×1 mL | 5×1 mL |
- 灵敏度好：模板为总RNA，灵敏度达10 pg；模板为miRNA，灵敏度不低于60个拷贝
- 特异性高：能区分同家族miRNA间单个碱基差异
- 仪器兼容性：全平台通用型，Bio-Rad CFX 96（NO ROX）、ABI 7500（Low ROX），ABI StepOnePlus（High ROX）等
- 稳定性好：试剂在 37℃放置7 d；冻融稳定50次；配置体系在25℃保留48 h后，效果不受影响
- 线性检测范围广，总RNA灵敏度达10 pg；miRNA灵敏度不低于60个拷贝
图. 以人工合成hsa-miR-let-7e-5p和293T细胞Total RNA为模板，分别稀释成以下梯度： 60拷贝到606拷贝（6个梯度）和10 pg-100 ng(5个梯度)，用Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法） (Cat#11148ES)进行逆转录， 获得的cDNA用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（加A法）(Cat#11171ES)检测hsa-miR-let-7e-5p基因表达情况。
- 高特异性，能区分同家族miRNA间单碱基差异
图. 人类hsa-let-7家族拥有多条miRNA，彼此间相差的碱基很少，甚至只有单碱基的差异。每个Let-7亚型（hsa-miR-let-7a~Let-7i，has-miR-98）的人工合成miRNA使用 Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法） (Cat#11148ES)进行逆转录合成cDNA，以不用的引物，用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（加A法）(Cat#11171ES)分别扩增这些miRNA，利用公式2-ΔCT x 100计算匹配率。结果显示，可有效区分密切相关的亚型家族成员。
冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。
Q: 加A法搭配你们的哪一款逆转录试剂？
A: 推荐搭配11148ES
Q: 除了加A法，茎环法推荐哪款产品做逆转录和qPCR？
A: 茎环法逆转录推荐用11139ES搭配自己的茎环引物；qPCR推荐使用11170ES。
Q: 茎环法和加A法的区别是什么？
A: 茎环法和加A法都可以用于miRNA的反转录。茎环法最大的特点是其逆转录和qPCR都是序列特异性的。但由于茎环引物的特异性，针对同一样本中不同的目的miRNA，需要配制不同的逆转录体系。简单来说，就是茎环法特异性更好，但需要设计茎环引物，并且一次逆转录只适用于一个miRNA。加A法相对更简单一些，但它是将所有的miRNA反转，所以后续的qPCR的假阳性的可能性会更高一点。
