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qPCR 实验 ,如何准确确定 cDNA 的稀释梯度及投入量？
qPCR 实验 ,如何准确确定 cDNA 的稀释梯度及投入量？
25
2026-10-10
方法 1：将 cDNA 做梯度稀释，把得到的不同梯度 cDNA 同时进行 qPCR，选择位于 15-33 范围内的 CT 值对应的 cDNA 稀释梯度作为最佳稀释梯度。如下图所示。（经验值认为，CT 值在 15-35 范围内是准确的） 方法2： 若拿到一个之前没有做过的体系，不知道其拷贝数高低时，可以先选择 cDNA 原液进行 qPCR 并得到 CT 值。根据公式：2△CT=浓度差，进行调整最佳 cDNA 稀释梯度。 例如：某处理组 GAPDH 内参基因，cDNA 原液上样 1 μl，得到的 CT 值为 10。CT值=10，显然偏小了，要想使该处理组 GAPDH 内参基因的 CT 值为 18，应该如何计算稀释梯度呢？依据公式「2△CT=浓度差」可知，△CT=18（预期 CT 值）-10（实际 CT 值）=8，那浓度差=2^8=256，也就是说在 cDNA 原液的基础上稀释256倍即可使该处理组 GAPDH内参基因的 CT 值达到 18。
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编号
名称
11199ES
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，Low Rox)
11200ES
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，High Rox)
11202ES
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus)
11203ES
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus)
11204ES
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Rox Provided Seperately)
11184ES
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix
11185ES
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix
11188ES
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox)
11189ES
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)
11190ES
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox)
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