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产品推荐|细胞转染老兵:磷酸钙法细胞转染试剂!

19463

2024-09-29

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磷酸钙转染试剂是一种经典的基因转染工具,它通过形成DNA-磷酸钙共沉淀物,促进细胞通过内吞作用吸收DNA,适用于多种真核细胞的瞬时和稳定转染,以其操作简便、成本低廉、转染效率高而广受欢迎。

 

 

基本原理

01

 

 
01

DNA与磷酸钙的结合

在含有磷酸盐的缓冲液(HBS)中,加入氯化钙(CaCl2)溶液和含有目的DNA的溶液。

DNA分子在生理pH条件下带负电荷,而磷酸钙带正电荷,通过静电作用,DNA与磷酸钙结合。

02

形成DNA-磷酸钙共沉淀物

当DNA与磷酸钙混合后,会形成DNA-磷酸钙共沉淀物。这些沉淀物是微小的DNA-磷酸钙复合体,它们可以吸附到细胞表面。
03

细胞吸收共沉淀物

将形成的DNA-磷酸钙共沉淀物添加到待转染的细胞培养基中。细胞通过内吞作用吸收这些共沉淀物。
 
04

DNA进入细胞

内吞后的DNA-磷酸钙复合体被包裹在内吞体内,随后内吞体与溶酶体融合,DNA被释放到细胞质中。
05

DNA的表达

释放到细胞质中的DNA可以通过细胞的核孔复合体进入细胞核,进行蛋白表达。

 

翌圣生物的磷酸钙法细胞转染试剂,基于传统方法优化,提高转染效率,减少细胞毒性,特别适合HEK293、293T和Hela等细胞系。适用于瞬时和稳定转染,即开即用,操作简便。

 

产品特点

02
  • 性能稳定:可在2-8℃保存,有效期2年;

  • 转染效率高:在293T细胞上阳性率高达95%;

  • 毒性低:对细胞基本无毒,转染后不影响细胞正常生长。

 

 

结果展示

03

6孔板中,使用翌圣磷酸钙法细胞转染试剂在293T细胞上转染GFP质粒, 按照转染试剂说明书进行操作;转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察并拍照。结果显示,翌圣磷酸钙法细胞转染试剂在293T细胞上的转染效率高达95%以上。

 

293T细胞(6孔板)

 

 

操作方法

04
 
01
 

按照60%左右的密度种植细胞入培养皿(瓶),细胞贴壁生长12-24小时后即可准备转染;

02
 

准备1.5 mL离心管,按照下表指示,依次加入DNA、HBS和CaCl2

03
 
振荡混匀后室温静置15分钟;
04
 

吹打3-5 次后均匀加到待转染细胞的培养液中,轻轻摇动培养皿(瓶);

05
 
放置37℃,5%CO2培养箱中进行细胞培养;
06
 
转染6小时后换液;
07
 
24-48小时检测目的蛋白质的表达。

 

不同培养容器试剂使用量(仅供参考)

细胞培养试剂

6孔板

T-25培养瓶

10 cm平皿

培养基(mL)

2

5

10

DNA(μg)

2

4

7.5

HBS(mL)

0.2

0.5

1

CaCl2μL)

14

35

70

 

 

产品信息

05

产品名称

产品规格

产品货号

Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂

200T

40803ES70

 

 

相关产品

06

 

 

转染试剂选择指南

 

 

 

货号

40801ES

40802ES

40807ES

40809ES

40810ES

40821ES

40824ES

40825ES

40828ES

40829ES

40830ES

产品

名称

LipoBooster

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mRNA

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细胞

类型

常规细胞

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昆虫细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

难转染

 

难转染

难转染

 

 

 

 

 

 

 

原代

 

原代

原代

 

 

 

 

 

 

 

干细胞

 

干细胞

干细胞

 

 

 

 

 

 

 

核酸

类型

DNA

DNA

 

 

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

siRNA

 

siRNA

 

 

 

 

 

 

 

 

miRNA

 

miRNA

 

 

 

 

 

 

 

 

ASO

 

ASO

 

 

 

 

 

 

 

 

mRNA

 

 

mRNA

 

 

 

 

 

 

 

应用

场景

用于各种核酸及原代等难转染细胞系

普遍用于多种细胞DNA转染

用于siRNA和miRNA转染,在多种难转染细胞上均能高表达

mRNA转染专用,在多种难转染细胞上均能高表达

针对sf9和High Five等昆虫细胞进行杆状病毒及质粒DNA转染

通用型病毒包装转染试剂(适用于LV及AAV)

AAV病毒包装专用转染试剂

LV慢病毒包装专用转染试剂

CHO悬浮细胞瞬转表达蛋白、抗体,含转染试剂、培养基、补料

293悬浮细胞瞬转表达蛋白、抗体,含转染试剂、培养基、补料

用于抗体、蛋白、细胞因子等瞬转表达,满足CHO及293悬浮细胞系需求

对标

竞品

thermo-lipo3000

thermo-lipo2000

thermo-RNAiMAX

thermo-Messenger

MAX

thermo-Cellfectin

polyplus-PEIpro GMP

polyplus-FectorVIR-AAV GMP/

PEIpro

polyplus-FectorVIR-LV/PEIpro

thermo-ExpiCHO

瞬转

试剂盒

thermo-Expi293

瞬转

试剂盒

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