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400-6111-883
Hieff Trans™ siRNA/miRNA体外转染试剂
产品货号:40806ES01
产品规格:0.1 mL
产品价格:¥ 372.00
类别:细胞转染

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Hieff TransTM in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent
    Hieff Trans
    TM siRNA/miRNA体外转染试剂

    40806ES01*

    0.1 mL

    372.00

    353.00

    40806ES02*

    0.5 mL

    1472.00

    1398.00

    40806ES03*

    1.0 mL

    2572.00

    2443.00


    产品描述

     Hieff TransTM siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子两性分子转染试剂,为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物,该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面,通过内吞进入细胞,形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用,能够吸收溶酶体中的H+,质子的不断流入,导致复合体肿胀破裂,从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

    该产品可在广泛的细胞系中,实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率,避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染,包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞;以及难以转染的悬浮细胞系,如K562或THP-1细胞,可达到80%的沉默效率;同时还包括一些原代细胞,原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等,可达到80%的沉默效率。


    运输与保存方法


    冰袋(
    wet ice)运输。产品4 ºC保存,一年有效。
    不可冷冻!


    注意事项


    1)整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料,如离心管、枪头、缓冲液。

    2)转染前,确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的,高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

    3)PEI阳离子转染试剂应该在4 ºC保存,要注意避免多次反复长时间开盖,否则可能会导致PEI挥发,降低转染效率。

    4)转染前一天,确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右,对于一些小细胞和生长缓慢的细胞,接种密度可适当扩大2倍。

    5)转染前,确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

    6)该产品只适合体外转染,不能用于体内转染。
    7)本产品仅作科研用途!


    操作流程


    一.贴壁细胞转染(以
    24孔板和转染1 nM siRNA为例,其他培养板加样体积请参考表
    1
    接种贴壁细胞

    1.为了提高转染效率,建议在转染前一天接种细胞,接种细胞密度建议30%-50%左右,建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

    2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物: 

    1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清培养基(如OPTI-MEMⅠ培养基)稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles),混匀。

    2)立刻100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂,旋涡10秒,充分混匀。

    3)在室温下孵育10 min,使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
    【注】:孵育时间不要超过30min

    4)在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

    5)直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。最终体积为600 µL ,siRNA终浓度为1 nM。

    6)37 ℃,5% CO2培养箱培养,直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24-72 h,蛋白表达水平在48-96 h。

    图片.png
     

    1. 转染贴壁细胞操作流程

    【注】:由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素,均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整,请参见下表1。

    1 siRNA终浓度为1 nM时,转染试剂、培养基的用量参考值

    培养皿

    siRNA物质的量(pmoles)

    每孔siRNA的含量(ng)

    siRNA转染试剂体积(µL)

    形成PEI-siRNA复合物的体积(µL)

    完全培养基的体积(含血清+双抗)

    加入复合物后,细胞培养基总体积

    96孔板

    0.17

    2.4

    0.7-0.8

    50

    125 µL

    175 µL

    24孔板

    0.6

    8.6

    1-3

    100

    500 µL

    600 µL

    12孔板

    1.2

    17

    2-6

    200

    1 mL

    1.2 mL

    6孔板

    2.2

    31

    4-12

    200

    2 mL

    2.2 mL

    25cm2培养瓶

    4.4

    62

    10-20

    400

    4 mL

    4.4 mL

    75cm2培养瓶

    10.5

    147

    30-50

    500

    10 mL

    10.5 mL

    2 siRNA终浓度为10 - 50 nM时,转染试剂、培养基的用量参考值

    培养皿

    siRNA转染试剂体积(µL)

    形成复合物的体积(无血清培养基)(µL)

    完全培养基的体积(含血清+双抗)

    加入复合物后,细胞总体积

    96孔板

    0.5-1.5

    50

    125 µL

    175 µL

    24孔板

    2-4

    100

    500 µL

    600 µL

    12孔板

    4-8

    200

    1 mL

    1.2 mL

    6孔板

    8-16

    200

    2 mL

    2.2 mL

    25cm2培养瓶

    15-25

    400

    4 mL

    4.4 mL

    二.悬浮细胞转染(以24孔板和转染5 nM siRNA为例,其他培养板加样体积请参考4)
    接种细胞

    1.为了优化悬浮细胞转染条件,与贴壁细胞相比,需要降低悬浮细胞的培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积,推荐的接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

    3 转染当天,根据培养皿的大小,接种悬浮细胞数量参考值

    培养皿

    底面积(cm2)

    每孔接种细胞悬浮液体积(μL)

    转染当天接种细胞数

    384孔板

    0.1

    25

    5 ×103~1×104

    96孔板

    0.32

    50

    1×104~ ×104

    24孔板

    2

    200

    1×105 ~ 2×105

    12孔板

    4.5

    500

    2×105 ~ 4×105

    6孔板

    9.6

    1000

    5×105 ~ 2×106

    25cm2培养瓶

    25-28

    2000

    2×106~ 5×106

    2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物: 

    1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清培养基(如OPTI-MEMⅠ培养基)稀释21 ng siRNA (1.5 pmols),混匀。

    2)向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂,立刻旋涡10秒,充分混匀。

    3)在室温孵育15 min,使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
    【注】:孵育时间不要超过30 min

    4)在每孔200 μL细胞悬浮液中,加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物,轻轻混匀。最终体积为300 µL,siRNA终浓度为5 nM。

    5)37 ℃,5% CO2培养箱培养4-6 h后,再加入700 µL完全培养基,轻轻摇动培养板使其混匀。

    6)继续放入培养箱中孵育,直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24-72 h,蛋白表达水平在48-96 h。

    【注】:为了优化内源性基因沉默,建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整,请参见下表4。

    4 siRNA浓度为5 nM时,在悬浮细胞中的参考值

    培养皿

    siRNA的浓度(pmoles)

    每孔siRNA的含量(ng)

    转染试剂体积(µL)

    形成复合物培养基体积(µL)

    悬浮细胞的体积

    转染4-6h后另加入培养基的体积

    384孔板

    0.25

    3.75

    1 ± 0.5  

    25

    25 µL

    0 µL

    96孔板

    0.5

    7.5

    2 ± 1

    50

    50 µL

    100 µL

    24孔板

    1.5

    21

    3 ± 2  

    100

    200 µL

    700 µL

    12孔板

    3.5

    49

    6 ± 4

    200

    500 µL

    1 mL

    6孔板

    6

    84

    10 ± 8

    200

    1 mL

    2 mL

    25cm2培养瓶

    12

    168

    15 ±10

    400

    2 mL

    4 mL

    5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

    培养皿

    siRNA的终浓度/孔(nM)

    转染试剂的体积/孔(µL)

    96孔板

    1 ~ 20

    1 ± 0.5

    24孔板

    2 ± 1

    12孔板

    3 ± 2

    6孔板

    10 ± 8

    96孔板

    20 ~ 50

    1.5 ± 0.5  

    24孔板

    3 ± 1

    12孔板

    5 ± 2

    6孔板

    15 ± 8

    三.miRNA转染操作流程
    该转染试剂也适合转染miRNA,转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。


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    名称

    货号

    规格

    价格(元)

    Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

    40802ES01*

    100 μL

    168.00

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    0.5 mL

    738.00

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    1.0 mL

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    Hieff TransTM siRNA/miRNA体外转染试剂

    40806ES01*

    0.1 mL

    372.00

    40806ES02*

    0.5 mL

    1472.00

    40806ES03*

    1.0 mL

    2572.00

     

    HB200716