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400-6111-883
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000  线性PEI转染试剂MW25000
产品货号:40815ES03
产品规格:1 g
产品价格:¥1855.00
类别:细胞转染

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

     Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000

    40815ES03

    1 g

    1855.00

    40815ES08

    1 g

    7255.00


    产品描述

    线性化聚乙烯亚胺PEI 25000转染试剂是一种高电荷阳离子聚合物非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成复合物,并使该复合物进入细胞中。该转染试剂是一种瞬时转染试剂,细胞毒性低,转染效率高,在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等。该试剂与含血清的培养基兼容,能高效的将核酸导入细胞。


    产品
    性质

    中文名(Chinese Name

    线性聚乙烯亚胺PEI 25000

    英文名(English Name

    Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 

    CAS号(CAS No.)

    9002-98-6, 26913-06-4

    分子式(Molecular formula)

    (CH2CH2NH)n

    分子量(Molecular weight)

    25,000

    外观(Appearance)

    白色至黄色固体

    熔点(Melting Point)

    73~75 ℃

    溶解性(Solubility)

    溶于热水,低pH冷水,甲醇和乙醇。不溶于苯,乙醚和丙酮

    结构式(Structure)

    图片.png
     


    运输与保存方法

    运输方式:室温运输。
    保存方式:粉末室温或4 ºC保存有效期2年。储存液 -20 °C保存,有效期1年;4 °C保存,有效期2周。不可重新冻存。


    注意事项

    1)配置好的PEI溶液从-20 ºC拿出融化后,可放在4 ºC冰箱保存,绝不可重新冻存。

    2)对大多数细胞来而言,每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用1.5~4 μL体积线性PEI转染试剂进行优化。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

    4)本产品仅用于科研用途,不可用于人体。


    储存液配置(
    1 mg/mL)

    1.材料

    PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水(WFI)或类似的生物级水、12 mol/L盐酸(HCl)、10 mol/L氢氧化钠(NaOH)、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

    2. 配置储存液(1 mg/mL)

    1)于1 L玻璃烧杯,将1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中,在磁子搅拌器上搅拌均匀,产生小涡。

    2)边搅拌边滴加入盐酸(12 mol/L)调节pH,直至pH<2.0。

    3)盖上烧杯顶部并搅拌3小时至完全溶解;整个过程要保持pH<2.0。

    【注】:可能会存在一些小纤维状颗粒不能溶解,这是正常现象。

    4)边搅拌边滴加入NaOH(10 mol/L)调节pH,直至到6.9 ~7.1。

    5)将溶液转入量筒内,并加水定容到1 L。

    6)用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌,即得到1 mg/mL的储存液。

    7)根据需要分装并储存在-20 °C,1年稳定。

    【注】:储存液再次融化后,可置于4 °C保存,2周稳定,但绝不可重新冻存。


    转染操作流程(以
    6孔板为例)

    1.接种细胞:为了提高转染效率,建议在转染前一天接种细胞,以转染时细胞密度在 70%~80%为宜

    2.准备DNA-PEI复合物:按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物: 

    1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA ,充分混匀 DNA稀释液

    【注】:无血清稀释液建议采用 Opti-MEM或ddH2O

    2)立刻向100 μL的DNA稀释液中加入5 μL的PEI 25000转染试剂,旋涡10秒,充分混匀。

    3)在室温下孵育10~25 min,使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

    3.转染细胞:

    1)在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

    2)直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。

    3)37 ℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快7 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

    4.稳转筛选(可选)

    转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37 ℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
    不同细胞培养容器转染用量(仅供参考):

    培养皿

    表面积(cm2

    DNA的量(μg)

    转染试剂的量μL

    稀释液体积μL

    培养基总量

    96孔板

    0.3

    0.1

    0.1

    10

    100 μL

    48孔板

    0.7

    0.2

    0.3

    20

    200 μL

    24孔板

    1.9

    0.5

    1

    50

    500 μL

    12孔板

    3.8

    1

    2

    50

    1mL

    6孔板

    10

    2

    4

    100

    2 mL

    25cm2培养瓶

    21

    4

    8

    200

    4 mL

    75cm2培养瓶

    58

    10

    20

    500

    10 mL


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    HB200731