细胞转染 | H9c2大鼠心肌细胞siRNA转染案例

2026-05-06

实验所用转染试剂

试剂名称	货号
Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂	40807ES

细胞培养与传代（T25）

润洗：吸弃旧培养基，加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。

消化：加入1 mL胰酶润湿瓶底，37°C孵育消化。

吹落：待细胞间隙变大、形态变圆时，直接用胰酶轻轻吹打下细胞。

终止：加入2-3 mL完全培养基终止消化，吹打混匀成细胞悬液。

接种：收集悬液，200 ×g离心3-5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬后分瓶，补足培养基继续培养。

本实验将H9c2细胞常规培养在含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液中，放置于37℃、5%CO₂培养箱内恒温培养，待细胞融合度达到85%-90%时进行传代，备用用于后续转染实验。

细胞转染（24孔板）

一、实验前准备（按说明书配液，一套操作10分钟搞定）

1. 细胞准备：转染前24小时，用胰酶消化并重悬细胞后，进行细胞计数。以合适的密度（每孔4×10⁴个）将细胞接种于24孔板中，每孔加入500 μL完全培养基。目标是转染时细胞的汇合度达到60% - 80%。本次实验细胞汇合度50%-60%就开始转染。

2. 试剂准备：

- siRNA：合成高质量siRNA，通常设计3个不同siRNA进行验证，初始浓度调整成20μM。
- 转染试剂：将RNAiBoost试剂和Enhancer增强剂在4°C冰箱外静置回温，使用前轻轻吹打随后分别涡旋混匀、瞬时离心，确认siRNA终浓度为20μM。
- 无血清培养基：准备用于稀释siRNA和转染试剂的基础培养基（如Opti-MEM）。

二、细胞转染

1. 稀释siRNA：吸取3 μL siRNA溶液与15 μL Enhancer增强剂溶液充分吹打混匀；

2. 稀释转染试剂：吸取6 μL RNAiBoost体外转染试剂溶液与（1）中溶液混合，并充分吹打混匀，室温孵育8 min。让转染复合物充分形成

3. 细胞转染：孵育结束后，向（2）中混合溶液加入15 μL的opti-MEM转染稀释液，并充分吹打混匀，随后将混合后的25μL转染复合物加入到24孔板的一个孔中，摇动混匀培养板中的液体，可根据需要的孔量进行配制转染复合物。

4. 细胞培养及检测：将细胞放回37°C、5% CO₂培养箱中培养；24 -48 h后检测细胞基因沉默水平。

三、转染后处理

1. 换液：转染后4-6小时，仔细观察细胞状态。若出现明显毒性，应吸弃含复合物的培养基，更换为500 μL新鲜预热的完全培养基。若细胞状态良好，可以不换液。本次实验不换液

2. 检测：通常培养48小时后，提RNA进行检测。本次实验转染后48h进行WB检测。

小贴士：

1、如果转染后有显著的细胞毒性，可以在6h换液或将用量减半，可以避免细胞毒性问题；

2、如果转染效率比较低，可以通过提高转染试剂用量，能够有效提高转染效率；

3、稀释saRNA和转染试剂，最好使用opti-MEM；

4、转染试剂兼容血清和双抗，但是稀释质粒和转染试剂用的必须是无血清无双抗培养基。

5、需严格按照表格中推荐用量进行转染复合物制备，如若增加或减少用量，需要等比例减少，以6孔板为例，若按照终浓度50nM进行实验，则按照说明书配置100ul转染复合物即可，若需要用量翻倍，需要配置200ul转染复合物添加到孔板中；相反，若用量减半，按照表格推荐用量，配置好的100ul转染复合物，只需要添加50ul即可。

实验结果分析

在H9c2大鼠心肌细胞转染siRNA，用翌圣 RNAiBoost转染，并通过WB检测转染效率。

数据来源：东南大学

整个实验操作流程特别省心，试剂配比完全按照说明书即可，不用反复摸索优化转染比例，新手也能快速上手。最惊喜的是，这款转染试剂对H9c2心肌细胞毒性极低，转染后细胞状态依旧保持良好，死细胞数量极少，转染效率稳定且高效，后续做qPCR、WB实验结果都清晰可靠，实验重复性拉满。

使用翌圣 RNAiBoost转染试剂在H9c2大鼠心肌细胞转染siRNA，结果显示，翌圣RNAiBoost 转染试剂能够高效转染，显著降低目的基因表达。

不同培养皿RNAiBoost转染试剂用量使用指南

细胞培养板	细胞培养基体积	saRNA溶液（原液浓度20 μM）	增强剂	转染试剂	无血清培养基体积	转染复合物体积
24孔板	500 μL	1.25 μL	6.25 μL	2.5 μL	15 μL	25 μL
12孔板	1.0 mL	2.5 μL	12.5 μL	5 μL	30 μL	50 μL
6孔板	2.0 mL	5 μL	25 μL	10 μL	60 μL	100 μL