基于MGISP-960自动化平台的猪肌肉DNA文库构建方法
基于MGISP-960自动化平台的猪肌肉DNA文库构建方法
29
2026-10-08
本研究聚焦猪肌肉样本的高通量DNA文库构建需求，针对传统手工建库操作繁琐、人为误差大、样本通量受限的痛点，依托自动化测序文库建库平台，建立一套适配猪肌肉组织特性的标准化建库方法。该方法依托自动化平台精准的移液控制与磁珠处理技术，完成片段化、接头连接、PCR扩增等全流程操作，无需大量人工干预，大幅降低人力与耗材成本。本研究为猪骨骼肌遗传资源挖掘、产肉性状关键基因筛选等后续组学研究，提供了高效可靠的文库制备支撑，也为本土猪种分子育种的大规模样本分析提供了技术参考。
建立适用于猪肌肉的全基因组重测序自动化建库流程
MGISP-960（华大智造）
猪肌肉
生猪种业育种、肉制品加工与营养、人类肌肉疾病大动物模型等
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
12972ES
自动化简版流程
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流程分类 |
流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
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1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 |
① 加入样本，样本投入量：200ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择30℃-15min。 |
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2 接头连接 |
提前将接头从10uM稀释1.5倍（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
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3 连接产物纯化和分选 |
① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.15x。 |
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4 文库扩增 |
将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
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5 扩增产物纯化 |
对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
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6 建库结束 |
建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）
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序号 |
物种 |
样本序号 |
文库浓度 （ng/μL） |
文库体积 (μL） |
总文库产量（ng) |
片段大小（bp）（抽检） |
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1 |
猪 |
肌肉-1 |
47.48 |
28 |
1330 |
460 |
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2 |
猪 |
肌肉-2 |
45.49 |
28 |
1274 |
468 |
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3 |
猪 |
肌肉-3 |
43.29 |
28 |
1212 |
/ |
片段大小图（抽检，检测仪器：Qsep）
结论：文库浓度均在43-47ng/uL之间，片段大小在460bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
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应用 |
产品货号 |
产品名称 |
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RNA建库 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 |
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接头 |
Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） |
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纯化磁珠 |
Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 |
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自动化耗材 |
0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） |
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96孔深孔板，U底（1.3 mL) |
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250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 |
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荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 |
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文库浓度测定 |
1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 |
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Qubit专用检测管 |
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核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） |
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文库条带大小检测 |
GoldBand 100 bp plus DNA Ladder |
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YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） |
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Agarose琼脂糖 |
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1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |
