基于MGISP-960自动化平台的小鼠粪便DNA文库构建方法
基于MGISP-960自动化平台的小鼠粪便DNA文库构建方法
227
2026-10-12
本研究针对小鼠粪便微生物DNA提取与文库构建流程繁琐、人工操作误差大的痛点，依托自动化核酸处理平台，建立一套标准化、高通量的小鼠粪便DNA文库构建方法。该方法可高效去除粪便中腐殖酸、胆红素等PCR抑制剂，稳定获得高质量微生物DNA，大幅降低人为干扰，提升样本处理效率与结果重复性，为肠道菌群16S rRNA测序等后续研究提供可靠的技术支撑。
目的：建立适用于小鼠粪便的全基因组重测序自动化建库流程
平台：MGISP-960（华大智造）
样本类型：C57BL 系列近交系小鼠粪便
下游应用：肠道微生物组研究、疾病标志物开发
建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
货号：12972ES
文库：华大
自动化简版流程
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流程分类 |
流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
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1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 |
① 加入样本，样本投入量：200ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择30℃-15min。 |
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2 接头连接 |
提前将接头从10uM稀释1.5倍（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
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3 连接产物纯化和分选 |
① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.15x。 |
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4 文库扩增 |
将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
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5 扩增产物纯化 |
对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
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6 建库结束 |
建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）
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序号 |
物种 |
样本序号 |
文库浓度 |
文库体积 |
总文库产量（ng) |
片段大小（bp）（抽检） |
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1 |
C57小鼠 |
粪便-1 |
36.71 |
28 |
1028 |
/ |
|
2 |
C57小鼠 |
粪便-2 |
43.86 |
28 |
1228 |
/ |
|
3 |
C57小鼠 |
粪便-3 |
30.77 |
28 |
862 |
/ |
|
4 |
C57小鼠 |
粪便-4 |
39.90 |
28 |
1117 |
/ |
|
5 |
C57小鼠 |
粪便-5 |
41.23 |
28 |
1154 |
/ |
|
6 |
C57小鼠 |
粪便-6 |
36.69 |
28 |
1027 |
/ |
|
7 |
C57小鼠 |
粪便-7 |
38.21 |
28 |
1070 |
/ |
|
8 |
C57小鼠 |
粪便-8 |
43.45 |
28 |
1217 |
/ |
|
9 |
C57小鼠 |
粪便-9 |
50.19 |
28 |
1405 |
/ |
|
10 |
C57小鼠 |
粪便-10 |
41.26 |
28 |
1155 |
/ |
|
11 |
C57小鼠 |
粪便-11 |
48.57 |
28 |
1360 |
/ |
|
12 |
C57小鼠 |
粪便-12 |
34.89 |
28 |
977 |
/ |
|
13 |
C57小鼠 |
粪便-13 |
40.61 |
28 |
1137 |
/ |
|
14 |
C57小鼠 |
粪便-14 |
45.90 |
28 |
1285 |
/ |
|
15 |
C57小鼠 |
粪便-15 |
44.27 |
28 |
1240 |
/ |
|
16 |
C57小鼠 |
粪便-16 |
42.61 |
28 |
1193 |
/ |
|
17 |
C57小鼠 |
粪便-17 |
48.70 |
28 |
1364 |
/ |
|
18 |
C57小鼠 |
粪便-18 |
45.14 |
28 |
1264 |
/ |
|
19 |
C57小鼠 |
粪便-19 |
41.85 |
28 |
1172 |
/ |
|
20 |
C57小鼠 |
粪便-20 |
61.34 |
28 |
1717 |
/ |
|
21 |
C57小鼠 |
粪便-21 |
53.02 |
28 |
1485 |
/ |
|
22 |
C57小鼠 |
粪便-22 |
45.51 |
28 |
1274 |
/ |
|
23 |
C57小鼠 |
粪便-23 |
44.12 |
28 |
1235 |
/ |
|
24 |
C57小鼠 |
粪便-24 |
39.14 |
28 |
1096 |
/ |
|
25 |
C57小鼠 |
粪便-25 |
40.88 |
28 |
1145 |
/ |
|
26 |
C57小鼠 |
粪便-26 |
43.46 |
28 |
1217 |
/ |
|
27 |
C57小鼠 |
粪便-27 |
38.81 |
28 |
1087 |
/ |
|
28 |
C57小鼠 |
粪便-28 |
48.86 |
28 |
1368 |
/ |
|
29 |
C57小鼠 |
粪便-29 |
49.17 |
28 |
1377 |
/ |
|
30 |
C57小鼠 |
粪便-30 |
46.23 |
28 |
1294 |
/ |
|
31 |
C57小鼠 |
粪便-31 |
42.62 |
28 |
1193 |
480 |
|
32 |
C57小鼠 |
粪便-32 |
45.67 |
28 |
1279 |
470 |
片段大小图（抽检，检测仪器：Qsep）
结论：文库浓度均在30-61ng/uL之间，片段大小在480bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
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应用 |
产品货号 |
产品名称 |
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RNA建库 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 |
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接头 |
Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） |
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纯化磁珠 |
Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 |
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自动化耗材 |
0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） |
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96孔深孔板，U底（1.3 mL) |
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250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 |
||
|
荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 |
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文库浓度测定 |
1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 |
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|
Qubit专用检测管 |
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|
核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） |
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|
文库条带大小检测 |
GoldBand 100 bp plus DNA Ladder |
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|
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） |
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|
Agarose琼脂糖 |
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|
1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |
