荧光定量PCR案例|小鼠骨髓来源巨噬细胞基因表达分析
样本&试剂&仪器平台
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样本来源 |
小鼠骨髓来源巨噬细胞 |
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试剂信息 |
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仪器信息 |
ABI Stepone |
扩增片段CG含量&长度
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GC含量 |
45%~55% |
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目标扩增长度 |
90bp~270bp |
反应体系
取2.5μg RNA进行反转录，反转录体系50μl。cDNA稀释10倍后取2μl作模板进行定量，定量体系20μl。
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组分 |
体积 （μL） |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
10 |
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Forward Primer (10 μM) |
0.4 |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.4 |
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模板DNA/cDNA |
2 |
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无菌超纯水 |
Up to 20 |
反应程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
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退火/延伸 |
60℃ |
34 sec |
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熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
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扩增曲线&熔解曲线
扩增曲线呈现S型曲线，熔解曲线峰型单一，无非特异扩增。
文末福利
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Hieff UNICON<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(抗体法,No Rox)
Hieff UNICON<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(抗体法,Low Rox)
Hieff UNICON<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(抗体法,High Rox)
IF>5000经典预混液Hieff<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)
IF>5000经典预混液Hieff<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox Plus)
IF>5000经典预混液Hieff<sup>®</sup> qPCR SYBR Green Master Mix(High Rox Plus)
