免疫组化实验系列产品-选购指南
免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）是一种实验技术，用于检测组织切片中特定抗原（通常是蛋白质）的存在和定位。该技术广泛应用于医学研究、病理诊断和生物学研究中。
IHC的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性。抗体是能够特异性识别和结合抗原的蛋白质。当抗体与组织切片中的相应抗原结合后，通过检测抗体上的标记物（如酶、荧光染料或金属颗粒）的信号，可以在显微镜下观察到抗原的位置和表达水平。
翌圣生物IHC全系列产品为您的IHC实验保驾护航，助您获取文献级IHC图像的旅途一帆风顺。今天，小翌带您详细了解下我们为您的IHC实验中关键步骤所准备的试剂及注意点，助您完美躲坑。
组织固定和切片
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复。冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法,因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
产品详情
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产品编码 |
产品名称 |
规格 |
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OCT冰冻切片包埋剂（进口原料） |
118 mL |
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OCT冰冻切片包埋剂 |
120 mL |
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PBS (1×) 细胞培养级 |
500 mL |
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PBS(10×) 细胞培养级 |
500 mL |
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4%多聚甲醛固定液 |
100 mL/500 mL |
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Poly-D-lysine 多聚-D-赖氨酸 (分子量:150000-300000) |
5 mg/10 mg/50 mg |
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Poly-L-lysine 多聚-L-赖氨酸 (分子量:150000-300000) |
5 mg/10 mg/50 mg |
烤片、脱蜡及水化
将切片放置与56~60℃的恒温箱中2~6小时，将带有蜡的组织切片牢固的黏在载玻片上，一面染色过程中切片脱落。使用二甲苯浸泡样品，脱掉组织中的蜡，但是由于进入组织中的二甲苯不能与水溶性染色液相容，需要使用梯度的乙醇将组织中的二甲苯逐步替代出来。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Dewaxing Agent 环保浸蜡脱蜡剂 |
500 mL |
抗原修复
细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出。
推荐使用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法，其效果优于微博修复发和直接煮沸修复法，使得免疫组化结果更加可靠。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Improved Antigen Retrieval Buffer(50X Citrate Sodium Buffer,pH 6.0) 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X) |
100 mL |
细胞膜打孔
当目标抗原位于细胞内部时，为了使抗体能够进入细胞内部，必须通过通透液暂时破坏细胞膜的完整性，使其变得通透。使用通透液有助于暴露抗原、核酸等作用靶点，使抗体、探针或标记物等更容易进入细胞内，从而确保染色等的检测效果。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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免疫染色通透液(Triton X-100) |
100 mL/500 mL |
阻断内源性过氧化物酶活性
内源性过氧化物酶广泛存在于一些细胞和组织中，包括血红细胞、肾脏和肝脏组织等。从而导致利用过氧化物酶的方法进行样品检测时会出现较高的背景，甚至出现假阳性结果。因此，细胞或组织样品等在染色前宜使用适当的过氧化物酶封闭液进行封闭，以消除内源性过氧化物酶的干扰。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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内源性过氧化物酶封闭液 |
100 mL/500 mL |
背景封闭
抗体能被组织切片中富有电荷的胶原和结缔组织成分吸附，从而导致背景着色，为了防止这种现象发生,最好在特异性抗体处理切片之前进行封闭，来降低背景染色和假阳性染色。我司给您准备好了各种动物的正常血清以及即用型封闭液。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Normal donkey serum 正常驴血清 |
10 mL |
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Normal rabbit serum 正常兔血清 |
5 mL |
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Normal mouse serum正常小鼠血清 |
5 mL |
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Normal goat serum 正常山羊血清 |
10 mL |
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Immunostaining Blocking Buffer 免疫染色封闭液 |
100 mL/500 mL |
抗原抗体结合
抗体的选择，选择已通过验证可用于免疫组化（IHC）应用的一抗，来识别靶点；即可选择直接带有偶联物的一抗又可以利用普通的一抗识别靶点，然后再利用带有偶联物的二抗进行识别一抗。
选择抗体需要确认一下重要信息。
一抗：
1. Antigen（抗原名称）：英文全称、简称都提供, 中文最好也提供
2. Reactivity（反应性）：实验用于什么物种, 是人, 大鼠还是小鼠等
3. Applications（应用）：已通过验证可用于免疫组化（IHC）。
产品详情
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细胞器 |
作用位点/原理 |
产品编码 |
产品名称 |
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细胞核 |
核膜内侧核纤层 |
Lamin A/C Rabbit mAb |
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核膜内侧核纤层 |
Lamin B1 Mouse mAb |
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核膜 |
Emerin Rabbit mAb |
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染色质 |
Histone-H3 Mouse mAb |
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染色质 |
Histone H2A.X Rabbit mAb |
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核仁 |
Fibrillarin Rabbit pAb |
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细胞增值性标记 |
PCNA Mouse mAb |
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细胞核 |
着丝粒 |
CENP-A Rabbit mAb |
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细胞膜 |
ATP1A1是水解ATP驱动钠和钾的转运的跨膜蛋白 |
alpha 1 Sodium Potassium ATPase Rabbit mAb |
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alpha 1 Sodium Potassium ATPase Rabbit pAb |
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内质网 |
内质网膜/腔 |
P4HB Rabbit mAb |
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粗面内质网 |
Calnexin Rabbit pAb |
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线粒体 |
线粒体基质 |
HSP60 Mouse mAb |
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线粒体膜间隙 |
Cytochrome c Mouse mAb |
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线粒体膜间隙 |
AIF Rabbit mAb |
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线粒体内膜 |
COXIV Mouse mAb |
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线粒体外膜 |
TOMM20 Rabbit pAb |
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线粒体外膜 |
Hexokinase I Rabbit mAb |
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线粒体外膜 |
Hexokinase II Rabbit mAb |
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细胞骨架 |
微管 |
β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体 |
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微管 |
β-Tubulin, Rabbit pAb 兔抗β-Tubulin多克隆抗体 |
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微管 |
α-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗α-Tubulin单克隆抗体 |
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微丝 |
β-actin, Rabbit mAb 兔抗β-actin单克隆抗体 |
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中间纤维 |
Vimentin Mouse mAb |
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高尔基体 |
顺面 |
GM130 Rabbit mAb |
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反面 |
Syntaxin 16 Rabbit pAb |
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溶酶体 |
溶酶体膜 |
LAMP1 Rabbit pAb |
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溶酶体膜 |
LAMP1 Rabbit pAb |
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溶酶体膜 |
LAMP2 Rabbit pAb |
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过氧化酶体 |
过氧化酶 |
Human Catalase Rabbit mAb |
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内涵体 |
早期内体 |
Rab5 Rabbit mAb |
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晚期内体 |
Rab7 Rabbit mAb |
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晚期内体 |
Rab9 Rabbit mAb |
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外泌体 |
肿瘤易感基因101 (TSG 101)和白细胞分化抗原(CD9)都是外泌体的良好标志物 |
TSG101 Rabbit mAb |
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TSG101 Rabbit pAb |
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CD9 Rabbit mAb |
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CD9 Rabbit pAb |
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细胞连接 |
在病理状态下，EpCAM集中表达于细胞间紧密连接处 |
EpCAM Rabbit mAb |
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N-cadherin是一种钙依赖的单链跨膜糖蛋白，主要介导细胞的同型和异型粘附。 |
N Cadherin Mouse mAb |
表格仅展示部分，详情请查阅翌圣官网产品中心。
二抗：
1. Host（一抗名称，种属来源）
2. Conjugate（标记物）：抗体是酶标记还是荧光标记，还是其他。
另外小翌还为您准备了免疫组化笔（Cat#36310），可帮您在不影响实验结果的前提下有效减少抗原抗体的使用量，并避免表面试剂流失造成的干片、脱片。
若您使用的是生物素标记的二抗，还需要添加辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（HRP-Streptavidin）后再显色。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit lgG(H+L) 过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) |
100 μL |
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Alkaline Phosphatase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG 碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG(H+L) |
100 μL |
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Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) 生物素标记山羊抗兔IgG(H+L) |
100 μL |
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Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) 过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
100 μL |
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Alkaline Phosphatase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) 碱性磷酸酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
100 μL |
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Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) 生物素标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
100 μL |
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ImmHis™ Hydrophobic Barrier Pen ImmHis™ 免疫组化笔(疏水屏障) |
1支 |
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HRP Streptavidin 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 |
100 μL |
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YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin YSFluorTM 488标记链霉亲和素 |
100 μL |
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YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin YSFluorTM 647标记链霉亲和素 |
100 μL |
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YSFluorTM594-conjugated Streptavidin YSFluorTM 594标记链霉亲和素 |
100 μL |
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Primary & Secondary Antibody Diluent for Immunohistochemistry 免疫组化用一抗二抗稀释液 |
100 mL/500 mL |
更多抗体产品欢迎进入官网选购：二抗选择指南
显色
显色是免疫组化染色的最后关键步骤，小翌给您准备了4款不同颜色的显示试剂盒，适用于不同显色系统，给您的图像标上您想要的颜色。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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BCIP/NBT Alkaline Phosphatase(AP) Substrate Kit for IHC BCIP/NBT显色试剂盒(蓝紫色,IHC) |
1 Kit |
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DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC(Yellow Color) DAB显色试剂盒黄色(IHC) |
1 Kit |
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DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC(Blue Color) DAB 显色试剂盒蓝色(IHC) |
1 Kit |
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AEC Peroxidase Substrate Kit for IHC(Red Color) AEC显色试剂盒红色(IHC) |
1 Kit |
复染及封片
为使组织切片清晰的显示组织结构，便于准确定位，常对切片进行复染，最常使用的细胞核染料为苏木精。最后使用封片剂保存您的辛苦劳作，DAB染色最后使用中性树脂封固，如果选用AEC染色，最后通常使用水性封片剂封片。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Hematoxylin Stain Solution 苏木素染色液 |
50 mL/100 mL/500 mL |
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Neutral Balsam,Mounting Medium for Microscopy 中性树胶(镜检用永久封片剂) |
100 mL |
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Fluoromount-G™抗荧光淬灭封片剂(水溶性) |
5 mL/25 mL |
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DAPI Fluoromount-G™ 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性) |
4 mL/20 mL |
以上就是IHC实验的全流程攻略啦，小翌还想偷偷告诉您，为了让您有更好的操作体验，我们为您准备了免疫组化试剂盒，包含以上操作所需的所有试剂（您只需准备好您要检测的一抗即可），让您的实验不仅结果好，而且省心。
产品详情
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货号 |
名称 |
规格 |
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Immunohischemistry Kit for Mouse Primary Antibody 小鼠免疫组化(IHC)检测试剂盒 |
100T |
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Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody 兔免疫组化(IHC)检测试剂盒 |
100T |
免疫组化常见问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
方案建议 |
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染色结果呈阴性、免疫组化染色弱 |
抗体来源选择错误 |
请确保一抗来源的种属为相同 |
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组织切片本身不存在目的蛋白 |
可通过 The Human Protein Atlas 数据库或 UniProt数据库查询目的蛋白在细胞或组织中的表达情况 |
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抗体浓度和质量问题 |
提高抗体工作浓度或延长孵育时间；确认抗体可进行IHC实验，通过非IHC实验排除抗体质量问题。 |
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脱蜡不完全 |
可根据切片上是否存在透明颗粒，判断是否存在脱蜡不完全，若存在，需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 |
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抗原修复不完全 |
对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合。 |
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细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应 |
可加入组织透化步骤，进行细胞膜或核膜的透化。 |
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封闭时间过长 |
若使用封闭液进行封闭，请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 |
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高背景染色 |
一抗浓度过高 |
对抗体进行滴定以确定获得特异性反应的最佳浓度。 |
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显色过度 |
缩短显色试剂 DAB 孵育时间。 |
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洗涤不充分 |
适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间。 |
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封闭不完全 |
延长封闭时间 |
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切片或细胞过于干燥或孵育温度过高 |
实验过程中请保持切片处于湿润状态，一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 |
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内源性过氧化物酶残余 |
适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 |
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非特异性染色 |
抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色 |
减少抗体孵育时间、降低抗体浓度 |
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内源性过氧化物酶残余 |
适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 |
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一抗导致的非特异性染色 |
多克隆抗体易于产生非特异性染色，结合抗体官网信息合理选择多克隆抗体或单克隆抗体。 |
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一抗种属来源与组织样本来源相同 |
如使用鼠源一抗检测小鼠组织，尽量选择种属来源与样本种属不同的一抗。 |
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切片或细胞过于干燥 |
实验过程中，需保持样本的湿润。 |
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阳性染色细胞定位不正确 |
抗原修复条件不合理 |
尝试改变抗原修复条件。 |
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固定方法不合理 |
可能由于不合理或不及时的固定导致抗原破坏，出现抗原弥散的现象，可尝试不同的固定剂或增加固定时间。 |
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离子相互作用影响抗原识别 |
尝试调整抗体稀释液的 pH 值或阳离子浓度。 |
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切片边缘着色 |
试剂未完全覆盖样本 |
边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心高而致染色深。免疫组化笔画圈应距组织边缘大于 3～4 mm，试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘 2 mm。 |
