Lipo3000转染解密：DNA为何必加P3000？siRNA为何不用？
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2026-03-10
如果你是生命科学领域的实验搬砖人，那么对于Lipofectamine 3000（以下简称Lipo3000）这个名字一定不会陌生。作为明星产品，它几乎是目前最主流的转染试剂之一。然而，很多同学在使用时只是机械地按照说明书操作：转DNA时要加P3000，转siRNA时就不加。你有没有想过——为什么？
一、转染DNA
角色一：DNA的“压缩打包员”
DNA分子在溶液中是松散的线团状，体积很大。P3000带有极高的正电荷密度，它能够与DNA紧密结合，将松散的DNA分子“压缩”成更小、更致密的颗粒。
为什么要压缩？
- 更容易入胞： 更小的颗粒尺寸（纳米级别）更有利于细胞通过内吞作用摄取。
- 更容易入核： 致密的DNA结构在一定程度上能保护DNA免受胞浆内核酸酶的降解。
简单来说，P3000就像是一个“私人教练”，先帮DNA“热身”、“收紧核心”，让它以最佳状态迎接后面的运输。
角色二：电荷的“超级增强器”
DNA是负电的，Lipo3000脂质体是正电的。但P3000的加入，相当于给DNA穿上了带更强正电的“外衣”。这使得最终的DNA/P3000/脂质体三元复合物携带更高的正电荷。
为什么要增强正电荷？
- 细胞膜表面带有负电荷。复合物携带的正电荷越强，它与细胞膜的亲和力就越大，内吞的效率也就越高。这对于一些本身内吞不活跃的细胞（如原代细胞、神经元）来说，是突破转染瓶颈的关键。
结论：转DNA时加P3000，是为了实现“高效压缩”和“强力吸附”，从而将DNA这种大分子高效地送进细胞。
siRNA转染——为什么P3000靠边站？
转染对比（图片来自AI）
二、转染siRNA
siRNA是长度为21-23bp的双链小RNA，用于RNA干扰实验。如果你在转siRNA时也加了P3000，很可能导致实验失败。原因如下：
原因一：siRNA“太小了”，不需要教练
siRNA的分子量极小（约13-15kDa），长度只有2纳米左右，本身就是一个非常致密的小片段。无需压缩： 它不需要像质粒DNA那样被压缩，因为它本身就足够小。用P3000去“压缩”siRNA，就像是拿压路机去压一颗绿豆——多此一举，反而可能破坏siRNA的双链结构。
原因二：过强的正电荷会导致“卡死”
siRNA的作用机制是进入细胞质后，与RISC复合物结合，发挥基因沉默效应。它不需要进入细胞核。如果加入P3000，会把siRNA也压缩成超级致密、带强正电荷的颗粒。这种颗粒虽然入胞效率高，但进入细胞后可能会紧紧结合在内涵体上，或者因为电荷作用被困在某个亚细胞结构中，无法有效释放到细胞质中与RISC结合。后果： 你明明看到细胞摄取了siRNA（比如用了荧光标记的siRNA），但目的基因的mRNA就是敲不低。这是因为siRNA被“锁死”了，没有发挥功能。
为了更直观地理解，我们整理了下表：
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对比维度 |
转染DNA |
转染siRNA |
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目标分子大小 |
大（几千碱基对） |
小（21-23bp） |
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是否需要压缩 |
是，需要P3000将其致密化 |
否，本身已经足够小 |
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最终作用部位 |
细胞核（转录） |
细胞质（RISC复合物） |
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是否需要入核 |
是 |
否 |
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推荐试剂组合 |
Lipo3000 + P3000 + DNA |
Lipo3000单独+ siRNA |
最后我们来一起看一下常见误区与避坑指南
误区1：转siRNA时顺手加了P3000，以为能提高效率。
结果： siRNA可能被锁死在内涵体里，敲低效率极低甚至无效。
纠正： 严格按照说明书，转siRNA时只使用Lipo3000脂质体，不加P3000。
结果： 转染效率显著下降，尤其对于难转细胞或大质粒，可能完全转不进去。
纠正： P3000是Lipo3000系统的核心组件，它的成本已经包含了其带来的效率提升。省了小钱，浪费了宝贵的细胞和抗体，得不偿失。
误区3：DNA和siRNA共转染时，可以不加P3000。
结果：转染效果不佳；
纠正：当同时进行DNA和siRNA转染时，仍需添加P3000。
Lipo3000的设计哲学，其实是对“货物”的精细化管理：对于大块头DNA，派一个教练（P3000）帮它压缩热身；对于小个子siRNA，则让它轻装上阵，直达战场。
翌圣研发的LipoBooster 3000（40801ES）是一款基于新型多聚体高分子材料开发的新型核酸转染试剂。其独特分子设计显著降低细胞毒性，并搭载智能抗酶降解机制，在递送过程中高效保护核酸免受胞内酶破坏，最大限度提升转染效率，满足DNA、mRNA、siRNA、miRNA、ASO等多种类型核酸转染。
图1. 翌圣LipoBooster 3000 （40801ES）转染试剂和进口品牌T3000同时在不同细胞中转染质粒DNA
图2. 翌圣LipoBooster 3000 （40801ES）转染试剂和进口品牌T3000同时在不同细胞中转染siRNA
转染试剂选购指南
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货号 |
40801ES |
40802ES |
40807ES |
40809ES |
40810ES |
40815ES |
40816ES |
40818ES |
40820ES |
40821ES |
40823ES |
40824ES |
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产品名称 |
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细胞类型 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
昆虫细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
常规细胞 |
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难转染 |
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难转染 |
难转染 |
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原代 |
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原代 |
原代 |
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干细胞 |
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DNA |
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siRNA |
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siRNA |
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miRNA |
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ASO |
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ASO |
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mRNA |
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mRNA |
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应用场景 |
用于各种核酸及原代等难转染细胞系 |
普遍用于多种细胞DNA转染 |
用于siRNA和miRNA转染，在多种难转染细胞上均能高表达 |
mRNA转染专用，在多种难转染细胞上均能高表达 |
针对sf9和High Five等昆虫细胞进行杆状病毒及质粒DNA转染 |
粉末PEI转染试剂，用于大规模细胞转染实验 |
基于293细胞进行慢病毒病毒、AAV病毒包装及蛋白表达 |
通用型病毒包装 转染试剂 （适用于LV及AAV） |
AAV病毒包装 专用转染试剂 |
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对标竞品 |
thermo-lipo3000 |
thermo-lipo2000 |
thermo-RNAiMAX |
thermo-MessengerMAX |
thermo-Cellfectin |
polyscience-PEI25000 |
polyscience-PEI MAX |
thermo-293fectin |
polyplus-PEIpro |
polyplus-PEIpro GMP |
polyplus-FectorVIR-AAV |
polyplus-FectorVIR-AAV GMP |
相关产品
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产品名称 |
产品规格 |
产品货号 |
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Hieff Trans®LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂 |
100μL/0.75mL/1.5mL |
40801ES01/40801ES03/40801ES04 |
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100 μL/1 mL |
40802ES01/40802ES03 |
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|
100μL/0.75mL/1.5mL |
40807ES01/40807ES03/40807ES04 |
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100μL/1mL |
40809ES01/40809ES03 |
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|
100μL/1mL |
40810ES01/40810ES03 |
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1g/5×1g |
40815ES03/40815ES08 |
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Hieff Trans®Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000（rapid lysis） |
100mg/1g |
40816ES02/40816ES03 |
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1 mL /10 mL /100 mL |
40818ES03/40818ES10 |
|
|
1.5 mL /10 mL/100mL |
40820ES04/40820ES10 |
|
|
10 mL /100 mL/1L |
40821ES10/40821ES60 |
|
|
1 mL /10 mL /100mL |
40823ES03/40823ES10 |
|
|
10 mL /100 mL /1L |
40824ES10/40824ES80 |
文末福利
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