荧光定量PCR案例|水稻基因表达分析(2)
样本&试剂&仪器平台
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样本来源 |
水稻根 |
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试剂信息 |
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仪器信息 |
ABI QuantStudio 6 Flex |
扩增片段CG含量&长度
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GC含量 |
43%~63%不等 |
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目标扩增长度 |
126bp~425bp不等 |
反应体系
以水稻根系RNA为模板，取1μg RNA进行反转录，反转录体系20ul。cDNA稀释5倍后取1μL作模板进行定量。
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组分 |
体积 （μL） |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
5 |
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Forward Primer (10 μM) |
0.2 |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.2 |
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模板DNA/cDNA |
1 |
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无菌超纯水 |
Up to 10 |
反应程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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变性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
20 sec |
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熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
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扩增曲线&熔解曲线
多种基因扩增曲线呈现S型曲线，熔解曲线峰型单一，无非特异扩增。
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