11198ES为什么扩增曲线无法达到平台期?
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2026-08-24
可能原因:a)模板量太低(CT 值 35 左右)。推荐 Ct 值:15<Ct<30。原因:Ct 值太大(如 Ct>30),刚进入指数扩增期几个循环就停止了反应,故无法到达平台期。 b)循环次数太少(30 cycles);循环次数过少(如 35)导致刚进入指数扩增期几个循环就停止了反应,故无法到达平台期。
试剂扩增效率低(CT 小,但无法达到平台期,曲线比较“趴”)。解决方案:a)提高模板量;参考 Q1 的优化方法。
b)提高循环次数;推荐循环数:一般 40。低丰度基因可设 45。c)做标准曲线测定扩增效率,若确实偏低,则换试剂。
d)增加 Mg2+浓度(会增加非特异扩增)
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