近年来，mRNA技术的发展应用持续得到关注。mRNA药物是通过将编码抗原蛋白的mRNA接种到人体，利用人体细胞内的遗传物质进行表达合成抗原蛋白，通过抗原蛋白诱导和激活机体的免疫系统产生免疫反应，从而达到预防和治疗疾病的目的。mRNA药物以安全、高效、周期短等的优势，能够同时诱导产生体液免疫和细胞免疫，目前已经应用在肿瘤、传染病、罕见病、心血管疾病等多种不同适应症。

※图片来源于沙利文

mRNA药物开发的整个流程大致可以分为几步：

序列确定&设计—mRNA体外转录—包封制备

mRNA体外转录（In Vitro Transcription, IVT）步骤：

质粒DNA 提取&线性化—体外转录（共转录加帽）—纯化—mRNA原液

目前现有的工艺大都是质粒DNA在酶切后进行一步纯化，在进行IVT步骤。翌圣生物基于成熟的mRNA 应用开发中心，开发出：“Onepot mRNA Transcription” 工艺，环状质粒DNA在酶切后不进行纯化，直接投料进行体外转录操作，也可以得到高质量的mRNA原液产品。整个工艺在确保产品和工艺质量的前提下，减短了现有工艺的时长。

工艺优势

工艺优化，减少IVT步骤，操作更简单；
物料成本降低，不需酶切后纯化物料以及质检；
mRNA质量&得率未降低。

数据展示

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1、产量数据

本工艺分别使用了2K 、4K 和9K的片段，进行IVT，1μg的质粒投入，可以产生150-200μg的mRNA，产量倍数高达近200。

*：20ul反应体系下的mRNA产量

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2、完整度检测

采用CE的方法分别对2K、4K 和9K的片段进行完整度检测，2K和4K的完整度>92%，9K的完整度>87%。

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3、mRNA加帽率检测

使用LC-MS对2K的序列进行加帽率检测，加帽率为99.5%。

上图：HPLC 紫外色谱图

下图：解卷积分子量图谱

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4、mRNA加尾率检测

使用LC-MS对样品进行加尾率检测，检测结果显示成正态分布。

上图：液质检测 TIC 图谱

下图：解卷积分子量图谱

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5、mRNA细胞活性检测

使用one-pot工艺和普通工艺合成的mRNA产物转染293T细胞24h后，荧光表达无差异。

产品列表

流程	定位	产品名称	货号
体外转录（试剂盒）	RNA体外转录	Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit	10623ES
体外转录（单组分）	限制性内切酶	BspQI GMP-grade (10 U/μL)	10664ES
		BsaI GMP-grade (20 U/μL)	10661ES
		10×Digestion buffer 3 GMP-grade	10667ES
	T7 RNA 合成酶	T7 RNA Polymerase GMP-grade（250 U/μL）	10625ES
	无机焦磷酸酶	Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade(1 U/μL)	10620ES
	无机焦磷酸酶	Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade (0.1 U/μL)	10672ES
	RNA 抑制剂	Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL)	10621ES
	转录buffer	10×Transcription Buffer GMP-grade(Mg2+ free)	10669ES
	转录buffer	10× Transcription Buffer 2 GMP-grade	10670ES
	NTP	ATP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10652ES
		CTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10653ES
		UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10654ES
		GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10655ES
		Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10656ES
		N1-Me-Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10657ES
DNA消化	模板DNA 消化	Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade	10611ES
RNA纯化	RNA纯化	Hieff NGS® RNA Cleaner	12602ES
mRNA修饰	二步法加帽技术	mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade	10614ES
		mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase GMP-grade	10612ES
		10× Capping Buffer GMP-grade	10666ES
		Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL)	10621ES
		GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)	10655ES
		S-adenosylmethionine (SAM)（32mM）	10619ES
	加尾酶	E.coli poly(A) Polymerase (5 U/μL）	14801ES
mRNA标准品	mRNA原液标准品	Firefly Luciferase-mRNA	17101ES
		eGFP-mRNA	17102ES
		OVA-mRNA	17103ES
		mCherry-mRNA	17104ES
环状RNA	线性RNA 去除	RNase R (20U/μL)	14606ES