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400-6111-883
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UCF.ME® mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade
产品货号:10614ES84
产品规格:2000 U
产品价格:¥ 4625
类别:RNA合成

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

     

     

    UCF.ME®mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

    10614ES84

    2000U

    4625

    4394

    10614ES92

    10000U

    17825

    16934

    10614ES94

    20000U

    29825

    /

    10614ES96

    100000U

    119325

    /

     

    产品描述

     

    真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1和D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5'末端(m7Gppp5'N)。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,并且保证正确的方向。

    本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供,可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。

     

    产品性质

     

    来源(Source)

    携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

    最适温度(Optimum Temperature)

    37℃

    宿主核酸残留(Host nucleic acid residue)

    <10fg/U

    宿主蛋白残留(Host protein residue)

    <50ppm

    病原体(HBV/ HCV/HIV)检测

    无检出

    内毒素残留(Endotoxin residue)

    <0.05EU/1000U

    支原体检测(Mycoplasma detection)

    无检出

    无菌检测(Sterility testing)

    无检出

    储存缓冲液(Storage Buffer)

    20 mM Tris-HCl pH 8.0,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100,50%甘油

    活性单位定义(Unit Definition)

    37℃条件下,1小时内将10 pmol GTP(α- 32P)掺入到一条含80个核苷酸(80 nt)转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。

    【注】:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告

     

    产品组分

     

    组分编号

    组分名称

    产品编码/规格


    10614ES84

    (2000U)

    10614ES92

    (10000U)

    10614ES94

    (20000U)

    10614ES96

    (100000U)

    10614

    Vaccinia Capping Enzyme(10U/μL)

    200μL

    1mL

    1mL×2

    10mL

     

    运输和保存方法

     

    冰袋运输,-20℃保存,有效期1年。

     

    注意事项

     

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

    2)所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬;

    3)在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构;

    4)对于已知5'末端结构的RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率

    5)5'末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

     

    使用方法

     

    1. 加帽反应(反应体系20 μL)

    本步骤适用于10 μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。

    1)取10 μg RNA至1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至15 μL;

    2)65℃加热5分钟;

    3)取出离心管置于冰上5分钟;

    4)依次加入以下组分:

    组分

    体积

    上述变性的RNA

    15μL

    10×Capping Buffer

    2.0μL

    GTP(10 mM)

    1.0μL

    SAM(2 mM)

    1.0μL

    Vaccinia Capping Enzyme(10U/μL)

    1.0μL

    【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0,50 mM KCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT。

    5)37°C孵育30分钟;

    6)RNA加帽完成,可进行后续实验。

    2. 5'末端标记反应(反应体系20μL)

    本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大,其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

    1)取适量RNA到1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至14 μL;

    2)65℃加热5分钟;

    3)取出离心管置于冰上5分钟;

    4)依次加入以下组分:

    组分

    体积

    上述变性的RNA

    14.0μL

    10×Capping Buffer

    2.0μL

    GTP mix

    2.0μL

    SAM(2mM)

    1.0μL

    Vaccinia Capping Enzyme(10U/μL)

    1.0μL

    【注】:GTP mix为GTP和少量标记物,其中GTP使用浓度参照注意事项5)。

    5)37°C孵育30分钟;

    6)RNA 5'末端标记完成,可进行后续实验。

     

    HB220224