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实验耗材
产品规格：2000 U
产品价格：¥ 4625
类别：RNA合成
说明书下载
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产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
促销价（元）
UCF.ME®mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade
10614ES84
2000U
4625
4394
10614ES92
10000U
17825
16934
10614ES94
20000U
29825
/
10614ES96
100000U
119325
/
产品描述
真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，并且保证正确的方向。
本品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。
产品性质
来源（Source）
携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli
最适温度（Optimum Temperature）
37℃
宿主核酸残留（Host nucleic acid residue）
<10fg/U
宿主蛋白残留（Host protein residue）
<50ppm
病原体（HBV/ HCV/HIV）检测
无检出
内毒素残留（Endotoxin residue）
<0.05EU/1000U
支原体检测（Mycoplasma detection）
无检出
无菌检测（Sterility testing）
无检出
储存缓冲液（Storage Buffer）
20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油
活性单位定义（Unit Definition）
37℃条件下，1小时内将10 pmol GTP（α- 32P）掺入到一条含80个核苷酸（80 nt）转录产物上所需要的酶量，即为1个单位。
【注】：具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告
产品组分
组分编号
组分名称
产品编码/规格
10614ES84
（2000U）
10614ES92
（10000U）
10614ES94
（20000U）
10614ES96
（100000U）
10614
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL）
200μL
1mL
1mL×2
10mL
运输和保存方法
冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
2）所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；
3）在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；
4）对于已知5'末端结构的RNA，可以延长反应时间至60分钟，提高加帽效率；
5）5'末端标记反应体系中，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反应（反应体系20 μL）
本步骤适用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反应，且可根据实验需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至15 μL；
2）65℃加热5分钟；
3）取出离心管置于冰上5分钟；
4）依次加入以下组分：
组分
体积
上述变性的RNA
15μL
10×Capping Buffer
2.0μL
GTP（10 mM）
1.0μL
SAM（2 mM）
1.0μL
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL）
1.0μL
【注】：10×Capping Buffer配方为：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30分钟；
6）RNA加帽完成，可进行后续实验。
2. 5'末端标记反应（反应体系20μL）
本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大，其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1）取适量RNA到1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至14 μL；
2）65℃加热5分钟；
3）取出离心管置于冰上5分钟；
4）依次加入以下组分：
组分
体积
上述变性的RNA
14.0μL
10×Capping Buffer
2.0μL
GTP mix
2.0μL
SAM（2mM）
1.0μL
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL）
1.0μL
【注】：GTP mix为GTP和少量标记物，其中GTP使用浓度参照注意事项5）。
5）37°C孵育30分钟；
6）RNA 5'末端标记完成，可进行后续实验。
HB220224