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400-6111-883
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400-6111-883
T7 RNA polymerase (50 U/μL)
产品货号:10618ES90
产品规格:5000 U
产品价格:¥532.00
类别:RNA合成

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    10618ES90

    5000 U

    532.00

    10618ES96

    25000 U

    2132.00

    10618ES97

    100000 U

    3832.00


    产品描述

    本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

    注:G*RNA转录的第一个碱基。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    10618ES90 (5000 U)

    10618ES96 (25000 U)

    10618ES97 (100000 U)

    10618-A

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    100 μL

    500 μL

    1 mL×2

    10618-B

    10×Transcription Buffer

    400 μl

    1 ml ×2

    8 ml

    注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP set solution 10133


    产品应用

    1. 单链 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体,以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针)

    2. 以(Cap analog)为引物合成Capped mRNA 


    酶活定义

    37℃、pH8.0 的条件下,1小时内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。


    运输储存方法

    干冰运输。-20℃保存,有效期一年。


    质量控制

    核酸内外切酶残留检测:100 U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

    RNase残留检测:100 U的本酶和1 μg 酵母总RNA在37℃下孵育1 h,RNA的电泳谱带不发生变化。

    大肠杆菌DNA残留检测:100 U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测,E.coli基因组残留低于10拷贝。


    注意事项

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    应用实例

    1、按下列体系配制反应体系

    组分

    体积(μL)

    终浓度

    10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)

    2

    CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each)

    0.4 each

    2 mM each

    T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

    0.5-1

    -

    RNase inhibitor (40 U/μL)

    1

    -

    RNase free H2O

    Up to 18

    -

    模板DNA

    2 (100 ng-1μg)

    -

    注: 1. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

            2. Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

            3.若转录长度< 100 nt,模板投入量可增加至2μg。

    4. RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603

    5.为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。

    2、37℃反应1-2个小时(若转录长度≤ 100 nt,增加时间至4-8h)。

    3、反应结束后,使用2U DNaseⅠ(无RNase)37℃ 15分钟去除DNA模板。

    4、转录产物纯化:体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化(12602),以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法(具体操作步骤可联系Yeasen索取)。


    注意事项

    1、DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

    2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

    3、在20 μL反应体系中加入0.02U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

    HB200604