新品│环状RNA研究核心酶原料:T4 RNA Ligase 1

环状 RNA (circRNA)是一类单链闭合的环状RNA分子,与线性mRNA相比,circRNA具有稳定性高、免疫原性低、表达持久等优势,已经成为下一代RNA疗法赛道的新秀。将IVT得到的线性RNA进行环化是circRNA人工合成的关键环节,常用的环化策略包括Ⅰ型内含子自剪切、Ⅱ型内含子自剪切和T4 RNA连接酶策略。连接酶策略中最常用的便是T4 RNA Ligase 1。

 

图1. T4 RNA Ligase 1环化机理

 

 
翌圣T4 RNA Ligase 1
 

T4 RNA Ligase 1是一种ATP依赖型连接酶,可以催化单链RNA、单链DNA、单核苷酸分子间或分子内的5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键。翌圣的T4 RNA Ligase 1由大肠杆菌重组表达,连接效率高,核酸酶残留水平低,可用于RNA与RNA分子间连接/分子内连接(RNA环化)、miRNA文库构建中的5'端接头的连接、5'-RACE (cDNA末端快速扩增)中将寡核苷酸连接到单链cDNA中等应用。

图2. T4 RNA Ligase 1连接类型示意图

 

 
性能展示
 

 

 
 
 
1、切口酶残留显著低于进口品牌N*

图3. 切口酶残留检测

 

将30 U翌圣及进口品牌N*的T4 RNA Ligase 1与底物DNA孵育,琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣3个批次的T4 RNA Ligase 1切口酶残留显著低于进口品牌N*。

 

 
 
 
2、无核酸外切酶残留

图4. 外切酶残留检测

 
 
 
3、无RNase残留

图5. RNase残留检测

 

 

 
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产品定位

产品名称

货号

RNA环化

T4 RNA Ligase 1

14651ES

RNA纯化

RNase R (20 U/μL)

14606ES

质粒线性化

BspQI GMP-grade(10 U/μL)

10664ES

Bsa I GMP-grade

10661ES

模板去除

DNase I GMP-grade

10611ES

体外转录

T7 RNA Polymerase GMP-grade (50 U/μL)

10624ES

Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade

10620ES

Murine RNase inhibitor GMP-grade

10621ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

 

 

 

 

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