细胞DNA提取全流程解析附

① RNase A溶解：向10 mg RNase A干粉中加入0.6 mL配套溶解液，颠倒混匀/轻柔涡旋至完全溶解（终浓度10 mg/mL），-20℃保存；

② 仪器消毒：核酸提取仪紫外灯照射30 min；

③ 深孔板预分装：实验前用力振荡几次预分装深孔板，避免液体残留在封口膜上；检查溶液是否有沉淀、磁珠是否能充分重悬。

取适量培养细胞（10万～50万），离心后弃上清收集细胞沉淀。加入200 μL裂解液 + 20 μL蛋白酶K + 10 μL RNase A，涡旋混匀。细胞量过多或过少都会影响最终得率：过多导致裂解不彻底、杂质残留；过少导致DNA得率不足下游用量。

将混合好的样本放入16通道核酸提取仪（翌圣80512）上，设置60℃孵育20 min，混匀速度选择M1（中速）。这一步同时完成膜蛋白消化、组蛋白降解与RNA清除三项工作。

裂解结束后，按预设程序向96深孔板各板位加入相应试剂，启动程序后仪器自动完成"加样→磁吸→转移→洗涤→洗脱"全过程，耗时约30～45 min/批。

细胞DNA提取的质控应"双线并行"：

① 光度计定量——取1～2 μL DNA溶液，Nanodrop测定浓度与纯度：

A260/A280应在1.8～2.0之间（RNA残留越低越接近2.0）；

A260/A230应>1.8（碳水化合物、盐、酚类残留越低越接近2.0）；

高质量DNA的Nanodrop峰图应呈现平滑的单峰曲线，A260处峰值明显，无杂峰。

② 琼脂糖凝胶电泳——取10 μL DNA + 2 μL loading buffer，1%琼脂糖凝胶、180 mA横流电泳25 min。

高质量基因组DNA主带应在10 kb以上、条带明亮清晰、无明显拖尾（说明无降解）；

加样孔内无亮带（说明无蛋白残留）；

无明显弥散小片段条带（说明RNA已清除彻底）。

验证18391细胞DNA提取试剂盒搭配细胞样本（贴壁/悬浮细胞），在16通道核酸提取仪（翌圣80512）上的提取性能，包括DNA完整性、纯度与稳定性。

验证18391细胞DNA提取试剂盒搭配细胞样本（贴壁/悬浮细胞），在16通道核酸提取仪（翌圣80512）上的提取性能，包括DNA完整性、纯度与稳定性。

① 试剂准备：RNase A干粉用0.6 mL配套溶解液溶解至10 mg/mL，-20℃保存；核酸提取仪紫外消毒30 min；预分装深孔板振荡混匀；

② 样本处理：取适量细胞（10万～50万），离心去上清，加入200 μL裂解液 + 20 μL蛋白酶K + 10 μL RNase A，涡旋混匀；

③ 裂解孵育：将样本放入16通道核酸提取仪，设置60℃ 20 min，M1混匀速度；

④ 深孔板布局：按结合液-600 μL / 洗涤A-800 μL / 洗涤B-800 μL / 洗涤C-800 μL+磁珠20 μL / 洗脱-50 μL的程序加样；

⑤ 程序运行：启动预设程序，仪器自动完成"磁吸-转移-洗涤-洗脱"全过程；

⑥ 质量评估：取10 μL提取液 + 2 μL loading buffer，1%琼脂糖凝胶180 mA横流电泳25 min，凝胶成像系统拍照。

琼脂糖凝胶电泳结果显示，提取的细胞基因组DNA主带位于10 kb以上，条带明亮清晰、无明显拖尾；加样孔内无明显蛋白残留亮带；泳道内无明显RNA弥散小片段条带。结果表明：

DNA完整性优：主带分子量大、条带锐利，无降解迹象；

RNA清除彻底：无明显弥散小片段条带，A260/A280比值落在1.8～2.0的正常区间；

蛋白残留低：加样孔无亮带，A260/A230比值良好；

杂质残留少：电泳图整体干净，无杂蛋白/盐离子拖尾。

DNA提取质量全面达标：完整性高，琼脂糖主带>10 kb）、RNA与蛋白残留均控制在下游qPCR/酶切/NGS建库可接受范围。

细胞量过多（>50万）会导致裂解液耗尽、蛋白酶K不足、磁珠过载，最终DNA得率反而下降、杂质残留上升。建议按说明书推荐10万～50万细胞/样。

细胞内RNA含量通常是DNA的5～10倍。省略RNase A会导致RNA严重污染：A260读数虚高、A260/A280偏离2.0、qPCR引物与RNA非特异结合、酶切图谱出现弥散条带。RNase A必须现配现用，-20℃保存避免反复冻融。

磁珠过多会吸附更多杂质（蛋白、盐、RNA片段），导致洗脱液中残留杂质；磁珠过少则DNA结合容量不足，得率下降。建议按说明书20～40 μL范围内调整。

基因组DNA是分子量极大的高分子（~10 kb以上），剧烈涡旋会将其打断成小片段，影响酶切与NGS建库。操作时应"轻柔颠倒混匀"或"M1中速混匀"，切忌高速涡旋。