细胞与基因治疗（CGT）、mRNA疫苗与药物正步入产业化快车道。质粒DNA既是mRNA体外转录（IVT）的模板，也是AAV、慢病毒等病毒载体瞬时转染的核心起始物料。

据ASGCT与Citeline联合统计，截至2025年第三季度，全球在研基因、细胞与RNA疗法试验共3243项。在此带动下，质粒DNA作为上游核心原材料，市场规模快速攀升—据Grand View Research数据，2025年全球质粒DNA制造市场规模约24.3亿美元，预计2033年将增至约92.9亿美元，年复合增长率约18.5%。产能扩张，质粒残留质控需求同步放大—高灵敏度、全流程可验证的残留DNA检测，正从“可选项”变为CMC体系刚需。

▍（一）质粒DNA残留的主要安全风险

质粒DNA在发挥关键作用的同时，也带来了不可忽视的安全隐患。在生物制品的生产纯化过程中，即使经过多步层析和核酸酶处理，仍可能有微量质粒DNA残留在最终产品中。这些残留主要带来以下的潜在风险：

•免疫原性风险：残留质粒DNA可能被人体免疫系统识别为“外来物质”，引发炎症反应、过敏甚至自身免疫疾病。质粒DNA中原核来源的未甲基化CpG序列可激活TLR9等先天免疫通路，导致发热、局部炎症等不良反应；

•基因整合风险：残留DNA片段若携带完整的抗生素抗性基因或功能性表达元件，存在插入宿主细胞基因组、异常激活原癌基因的理论潜在风险；

•传染性风险：质粒DNA若携带病毒来源的调控序列（如SV40启动子等），可能带来潜在的生物学危害。

▍（二）全球主流监管标准

各国药品监管机构对生物制品中DNA残留量均制定了严格的限量标准，且随着检测技术发展，要求日趋严格：

表1. 全球主流监管标准汇总

▍（三）检测方法学共识

《中国药典》2025年版通则3407收录了DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法三种外源性DNA残留检测方法；其中定量PCR法因高灵敏度、高特异性，已成为行业主流检测方法。2025年版《中国药典》已于2025年10月1日正式实施，此次修订标志着中国药品质量控制迈入国际化、科学化的重要新阶段。在此背景下，具备全验证数据的qPCR检测试剂盒已成为生物制品放行的核心工具—翌圣41323ES正是基于这一需求而设计开发。

翌圣生物自主研发的质粒DNA残留检测试剂盒（货号：41323ES），是用于定量分析疫苗、基因和细胞治疗产品等生物制品中质粒DNA残留的专用试剂盒。本试剂盒针对市场所用质粒共有DNA序列设计特异性引物，采用qPCR荧光探针原理，专一快速地检测残留的质粒DNA，试剂盒配套有线性Plasmid DNA Control（质粒DNA定量参考品）。该试剂盒可与翌圣磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（Cat#18469ES）配套使用，实现从样本前处理到检测的全流程覆盖。

▍应用场景

•细胞基因治疗产品：覆盖研发到放行的质粒残留检测需求，尤其关注AAV、慢病毒载体纯化后期质粒与病毒颗粒共洗脱的风险节点，为终产品安全性放行提供数据支撑。

•mRNA疫苗与治疗药物：精准检测IVT原液中线性化质粒模板残留，该步骤残留直接进入成品，无二次去除机会，是mRNA药物放行的核心指标。

•重组蛋白与抗体药物：针对采用质粒构建的工程细胞株表达系统，在工艺验证中用于确认质粒骨架序列的清除效率。

▍产品特点：

•抗干扰性：针对复杂基质，样本加标回收率至少能达到70~130%；

•灵敏度高：定量下限(LLOQ)为4 copies/μL；

•精密度高：批间差异小，中间精密度CV＜15%；

•专属性强：特异性检测质粒DNA残留，不受其他外源基因组DNA干扰；

•防干扰强：引入内部质控(IC)，可排除样本干扰、反应配制异常等因素，有效避免假阴性；

•验证完善：参考ICH Q2（R2）分析方法验证指导原则，可提供完善的验证报告;

•符合法规：按照EP2.6.7、JP 3和USP 63药典要求验证，符合国际权威机构的标准；

•保障品质：试剂盒所需酶原料全自产，且已产业化，供货稳定。

▍完整方法学验证参数汇总：

表2. 方法学验证参数汇总

试剂盒线性范围为：4×10¹ copies/μL ~ 4×10⁶copies/μL，R²=1，90%≤扩增效率≤110%，各浓度检测值CV＜15%。

图1. 质粒DNA标曲线性图（左）和扩增曲线线性图谱（右）

空白样本加标回收实验：

分别检测4×10⁵copies/µL、4×10³copies/µL、4×10¹copies/µL三个浓度质粒DNA样本，进行3次检测，分析样本回收率和CV。对于不同浓度DNA样本回收率均在70%-130%之间，CV均<20%。

表3. 空白样本加标回收率

分别检测10 copies/µL，4 copies/µL，1 copies/µL浓度的质粒DNA，每个浓度10个重复。结果显示，在4copies/µL及以上浓度，CV<20%，即质粒DNA残留检测试剂盒的定量限可达4copies/µL。

图2. 4copies/μL质粒DNA qPCR检测结果

表4. 质粒DNA定量限检测结果

完整验证原始数据可查阅配套《产品性能验证报告》。

在药监核查趋严、中美双报常态化的背景下，质粒DNA残留检测已成为基因治疗、mRNA疫苗、细胞治疗及重组蛋白企业必须筑牢的质量防线。2025年版《中国药典》的正式实施，进一步提升了生物制品中外源DNA残留的检测标准。翌圣41323ES质粒DNA残留检测试剂盒以4 copies/μL的超高灵敏度、自产酶的供应链保障、全面符合中外法规的验证体系，为基因治疗、mRNA疫苗、重组蛋白等生物制品提供从工艺开发到商业化放行的全链条质控支持，护航每一款创新生物药安全上市。