研究背景

年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人不可逆视力丧失的主要原因，预计到2040年全球患病人数将达2.88亿。其中，湿性AMD（wAMD）虽仅占AMD病例的10-15%，却导致了超过90%的严重视力丧失病例。其病理核心是脉络膜新生血管（CNV）形成，主要由血管内皮生长因子（VEGF）驱动。

目前wAMD的临床治疗主要包括抗VEGF疗法和光动力疗法（PDT）。抗VEGF疗法通过眼内注射抑制新生血管生长，但部分患者响应不佳，且频繁注射存在眼内炎等安全风险。PDT通过光敏剂维替泊芬（VER）在近红外光照射下产生活性氧（ROS）选择性封闭新生血管，但术后常出现反应性VEGF上调，导致CNV复发。如何将两种疗法的优势结合并规避其缺陷，是临床亟待解决的问题。

2026年1月，天津医科大学总医院颜华、谢松波课题组在国际权威期刊 《Advanced Science》（中科院一区TOP，IF=14.3）在线发表了题为 DNA Nanoflower LYTACs Enable Efficient VEGF Degradation and Verteporfin Loading for Combined Therapy of Wet Age-Related Macular Degeneration（https://doi.org/10.1002/advs.202515852）的研究性论文。该研究首次开发了一种基于DNA纳米花的溶酶体靶向嵌合体（LYTAC）平台，用于wAMD的精准联合治疗。研究团队创新性地将靶向VEGF的核酸适配体与靶向溶酶体转运受体的适配体通过滚环扩增（RCA）技术组装成DNA纳米花（NF），该结构不仅能高效捕获并引导病灶区域VEGF至溶酶体降解，同时作为载体负载疏水性光敏剂维替泊芬（VER）。所构建的NF@VER在近红外光照射下产生ROS杀伤血管内皮细胞，双重作用有效阻断VEGF诱导的CNV，且未见明显副作用。这一突破性研究不仅为wAMD治疗提供了“蛋白降解+光动力”协同新策略，更展示了DNA纳米材料在眼科精准药物递送中的巨大潜力。

实验方法与结果

1. 材料合成与表征检测

NF@VE的R构建：设计靶向VEGF和IGF2R的适配体序列，通过滚环扩增（RCA）自组装形成DNA纳米花，并在合成过程中负载维替泊芬（VER）。

表征检测：使用扫描电镜（SEM）观察形态，动态光散射（DLS）测定粒径和Zeta电位，紫外-可见光谱（UV-vis）验证VER装载。

2. NF介导VEGF的溶酶体降解

细胞摄取实验：低温（4°C）下NF结合细胞膜，37°C下显著内吞；流式细胞术显示NF摄取呈时间依赖性。

VEGF降解效果：ELISA结果显示NF呈剂量依赖性降低VEGF水平；VEGF适配体、IGF2R适配体或scrambled NF对照组无降解效果；NF处理显著抑制下游p-AKT水平。

溶酶体定位与机制验证：荧光共定位显示NF与溶酶体高度重叠；溶酶体抑制剂（CQ、BafA1）显著抑制NF介导的VEGF降解，而蛋白酶体抑制剂MG132无影响。

3. NF@VER在NIR光照下诱导ROS产生与内皮细胞死亡

光照条件优化：CCK-8实验确定4分钟NIR光照为安全且有效的条件；确定500 nM VER为有效浓度。

细胞摄取与定位：NF@VER被内皮细胞摄取，并与线粒体共定位。

ROS检测：DCFH-DA探针显示NF@VER在光照下显著产生ROS，无光照时无ROS生成。

线粒体损伤评估：TMRE染色显示NF@VER光照组线粒体膜电位显著下降。

细胞死亡评估：Calcein-AM/PI染色显示NF@VER光照组大量细胞死亡；CCK-8验证NF@VER在光照下呈剂量依赖性杀伤细胞，无光照时无毒性。

4. NF@VER抑制激光诱导的CNV（体内）

模型建立：激光诱导CNV小鼠模型。

药物递送与定位：Cy5标记的NF@VER在玻璃体注射后72小时仍可见，并与CD31共定位，表明富集于CNV区域。

治疗效果评估：FFA显示NF@VER光照组显著减少渗漏面积；RPE-脉络膜铺片染色显示CNV面积显著缩小；ELISA显示NF处理组VEGF水平下降；Western blot显示p-AKT水平下降。

5. NF@VER的长期眼内安全性与系统免疫原性评估

眼部安全性：裂隙灯与眼底照相显示角膜、晶状体、视网膜无异常；30天后Cy5信号消失，HE染色显示眼组织无损伤。

系统安全性：主要器官（心、肝、脾、肺、肾）HE染色未见损伤；血清与视网膜-脉络膜组织中IL-6和TNF-α水平未见升高，提示无炎症反应。

结论

本研究成功构建了一种基于DNA纳米花的整合型LYTAC平台NF@VER。该平台通过核酸适配体介导的溶酶体靶向降解通路，高效清除病变区域VEGF；同时作为载体装载光敏剂维替泊芬，实现近红外光控的PDT治疗。NF@VER通过VEGF降解与PDT的协同作用，在激光诱导CNV小鼠模型中有效抑制脉络膜新生血管，且具有良好的眼内和系统生物安全性。这一创新策略为wAMD的精准联合治疗提供了新思路，解决了PDT后VEGF反馈性上调及光敏剂疏水性等临床难题。

yeasen助力产品

10301 Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)

翌圣生物相关产品