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400-6111-883
T4 DNA Ligase
产品货号:10301ES40
产品规格:40000 U(40 KU)
产品价格:¥446.00
类别:建库模块与单酶原料

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  • HB190423

    产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)

    10301ES40

    40000 U (40 KU)

    446.00


    产品描述


    Hieff® Quick T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品,该产品已经过高通量测序验证,质量优异。对于无需进行体系调整的客户,推荐选购Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)。


    产品组分


    组分编号

    组分名称

    规格

    10301-A

    Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)

    100 µL

    10301-B

    10 × T4 DNA Ligase Buffer

    250 µL


    运输和保存方法


    冰袋运输,-20℃保存,有效期2年。


    单位定义


    在20 μL的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


    质量控制


    核酸外切酶残留检测:2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

    核酸内切酶残留检测:2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时,DNA电泳谱带不发生变化。


    注意事项


    1)Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请颠倒混匀后使用。

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法


    1.目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15 min即可。

    表1  Adapter Ligation体系

    名称

    体积(μL)

    dA-tailed DNA

    60

    10 × T4 DNA Ligase Buffer

    10

    50% PEG6000

    10*

    DNA Adapter

    X**

    Hieff® Quick T4 DNA Ligase

    1-5***

    ddH2O

    To 100

    【注】:

    *试剂盒内未提供50% PEG6000,需自行准备。

    **接头用量参考表2。

    ***Hieff® Quick T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。

    2. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer,用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

    表2  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    1 μg

    10:1

    50 ng

    100:1

    500 ng

    20:1

    25 ng

    200:1

    250 ng

    40:1

    1 ng

    200:1

    100 ng

    100:1

    500 pg

    400:1

    【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。

    【接头添加计算举例】

    当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

    第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];Input DNA摩尔数(pmol)=100 ÷(0.66×300)=0.5 pmol;

    第二步,计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例;根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;

    第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)

    综上,接头可添加3.4 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)