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400-6111-883
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400-6111-883
T4 DNA Ligase (5 U/µl)
产品货号:10300ES80
产品规格:1000 U
产品价格:¥425
类别:传统克隆

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  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

    10300ES80

    1000 U

    425.00

    Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

    10300ES97

    50000 U

    18654.00


    产品描述


    Hieff® Gold T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键,还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接,但不能催化全单链核苷酸间的连接。

    本品主要适用于标记RNA 3’-末端,环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。


    产品组分


    组分编号

    组分名称

    产品货号(规格)

    10300ES80(1000 U)

    10300ES97(50000 U)

    10300-A

    Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

    200 µL

    10 mL

    10300-B

    10 × Ligase Buffer

    400 µL

    20 mL


    运输和保存方法


    冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


    单位定义


    在20 μL的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


    质量控制


    核酸外切酶残留检测:30 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

    核酸内切酶残留检测:30 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时,DNA电泳谱带不发生变化。


    注意事项


    1)Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请颠倒混匀后使用。

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法


    1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系:

    组分

    使用量

    载体DNA

    50-100 ng

    插入片段

    片段与载体的分子摩尔比应在3:1-5:1

    10 × Ligase Buffer

    2 µL

    Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

    1 µL

    ddH2O

    To 20 µL

    注:平末端载体与DNA片段进行连接时,应先将载体进行去磷酸化处理,以防发生自连接现象。为提高连接效率,每20 µL反应体系中可以加2 µL 50% PEG 4000。

    2. 16℃反应过夜。

    3. 转化实验

    1)将连接产物加入到100 µL 感受态细胞中(连接产物不应超过感受态细胞的1/10),轻弹混匀,冰上孵育30 min。

    2)将离心管于42℃,热激90 sec(不要晃动),之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。

    3)向离心管中加入900 µL LB或SOC培养基,37℃,150 rpm,振荡培养45 min,该过程使菌体复苏,抗性基因表达。

    4)2500 g 离心5 min,吸去900 µL上清,用剩余培养基重悬菌体,用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀,待菌液被平板吸收后,37℃倒置培养过夜。

    注:如果使用超级感受态细胞(转化效率>108 cfu/µg),可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板,剩余菌液可在4℃保存,1周内均可重新涂板。


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