RPA荧光型原料，解锁恒温扩增新可能

在分子诊断技术飞速迭代的今天，精准、快速、便捷的检测需求已渗透到医疗、农业、食品安全、生物安全等多个领域。重组酶聚合酶扩增技术（RPA）作为可替代PCR的新型等温扩增技术，凭借37~42℃恒温反应、10~30分钟快速出结果、对仪器依赖度低的核心优势，成为即时检测（POCT）领域的核心解决方案，而RPA荧光型原料，正是这一技术落地应用的“核心密码”，直接决定了检测结果的灵敏度、特异性与稳定性。

荧光型RPA原理介绍

不同于传统扩增原料，RPA荧光型原料以“荧光信号实时反馈”为核心特色，将荧光标记技术与RPA扩增原理深度融合，实现了“扩增与检测同步进行”的突破。其核心组分涵盖重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）、链置换DNA聚合酶、荧光探针及配套缓冲体系，各组分协同作用，在恒温条件下快速启动核酸扩增，同时通过荧光染料或荧光探针的信号变化，实时反映扩增进程，无需额外的电泳检测步骤，让检测结果可视化、精准化，大幅提升检测效率与便捷性。

 

图1. RPA等温扩增技术原理图

RPA荧光探针检测法的分类

荧光探针检测法：向基础型RPA反应体系中加入核酸外切酶Ⅲ(exonucleaseⅢ，exo)和exo荧光探针，或加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(formamide pyrimidine DNA glycosylase，fpg)和fpg荧光探针，用荧光定量仪来实时检测RPA反应。

 exo探针法：在RPA的基础上，加入了核酸外切酶III（exonuclease III，即exo）和exo荧光探针，核酸外切酶III会特异地切割荧光探针（THF位点），荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。

fpg探针法：在RPA的基础上，加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶（fpg）及fpg荧光探针，当探针与模板结合时，fpg酶识别dR连接臂（dR group）并切割该位点，使得荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。

 

图2. Exo（左）和fpg（右）探针法检测原理图

RPA荧光型原料的优势

作为RPA技术的“核心基石”，荧光型原料的性能直接决定了检测方案的落地效果。优质的RPA荧光型原料，需具备三大核心优势：其一，高灵敏度，可精准捕捉低浓度靶标核酸，检测极限接近PCR水平，即使是微量样本也能精准检出，满足基层及现场检测的严苛需求；其二，高特异性，通过特异性探针设计与组分优化，有效避免非特异性扩增，降低假阳性风险，保障检测结果的可靠性；其三，高稳定性，无论是常温运输储存，还是复杂检测环境，都能保持稳定的酶活与荧光性能，同时适配冻干工艺，进一步提升产品便携性，减少冷链运输成本。

RPA荧光型原料的应用

如今，RPA荧光型原料已广泛应用于各领域即时检测场景：在医疗领域，可快速检测呼吸道病原体、消化道病毒等，30分钟内即可出具检测结果，为临床诊断提供快速支撑；在农业领域，用于动植物疫病检测，助力病虫害早发现、早防控，保障农产品质量安全；在食品安全领域，可快速筛查食源性致病菌，守护餐桌安全；在生物安全领域，能快速识别有害微生物，筑牢公共卫生防护屏障。这些场景的落地，离不开RPA荧光型原料的技术赋能，也推动着原料技术向更高效、更稳定、更便捷的方向迭代。

产品推荐指南

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