病原UCF解决方案 | 百日咳检测，急性期快检还是变异追踪？qPCR与tNGS双技术路径
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2026-08-04
百日咳是由百日咳鲍特菌引起的急性呼吸道传染病，典型表现为阵发性痉挛性咳嗽。疫苗免疫保护力随时间衰减、青少年及成人感染增多，以及病原体适应性变异，使“百日咳再现”成为持续关注的问题，因此实验室检测既要解决快速发现，也要兼顾复杂样本和流行病学调查。
百日咳鲍特菌检测应该选qPCR还是tNGS？当目标是咳嗽早期的快速筛查、婴幼儿及密切接触者检测，或呼吸道样本批量监测时，荧光定量PCR流程短、靶向明确；当需要区分百日咳鲍特菌与其他博德特菌，或分析PRN等疫苗相关抗原基因变化、毒力区域、分型位点及传播关系时，可采用靶向tNGS。
更合理的分层路径是：qPCR承担快速定向检测，tNGS承担相关菌鉴别、变异监测、分型和溯源，并与培养、血清学、临床和流行病学资料综合解释。
【原料解决方案】翌圣生物提供从鼻咽拭子、鼻咽吸取物及其他呼吸道样本核酸提取，到qPCR扩增、tNGS多重扩增建库及RDC定制开发的原料支持，服务疾控、医院、海关、检测机构及IVD企业。
百日咳病原核酸检出与病程和采样质量密切相关。急性期鼻咽部细菌载量相对较高，抗菌药物使用或病程延长后检出率可能下降。方案开发应验证采样部位、拭子类型、运输保存、裂解效率、抑制物去除及内标监控。
qPCR可围绕百日咳鲍特菌特异靶标、博德特菌属靶标及鉴别相关靶标设计单重或多重体系，用于咳嗽急性期疑似病例检测、密切接触者筛查和聚集性疫情监测及产品研发。阳性结果应结合病程、临床表现、培养和流行病学信息解释；阴性结果不能脱离采样时机、样本类型和菌量单独排除感染。
通用型全预混、高灵敏并支持快速扩增，适合强调时效和批量通量的多重qPCR方案。
兼顾高灵敏与防污染设计，适合低浓度模板检测和常规实验室体系开发。
可冻干快速qPCR预混液，适合现场应用、常温运输或长期储存形态开发。
靶向tNGS可在一个Panel中覆盖百日咳鲍特菌菌种鉴别、分型位点、毒力区域及PRN等疫苗相关抗原基因，适合多种博德特菌鉴别、疫苗相关抗原基因变化监测、聚集性疫情调查及菌株序列比较。对于常规qPCR靶标信号不一致或来源不明的聚集性病例，tNGS可提供额外序列证据，但仍需结合病程、疫苗史和流行病学调查。
tNGS输出受Panel设计、扩增均一性、测序深度、宿主背景和生信数据库影响。若目标是高分辨率菌株亲缘关系或完整传播链分析，应根据分辨率要求评估长片段Panel、培养分离物测序或全基因组方案。
4× Hieff® Multiplex PCR Master Mix 2.0（12977ES）支持2000 bp以内不同片段长度的多重扩增，适合连续分型区域和较长基因区段覆盖。
4× Hieff® Multiplex PCR Master Mix（12948ES）支持1—2000重Panel扩增，适合并行覆盖鉴定、分型和质控靶标。
tNGS RDC可提供百日咳鲍特菌Panel靶标筛选、引物池设计、扩增均一性优化、原料筛选、返样验证和产品定型支持。
- 定制化IVD原料开发
- 分子诊断体系开发经验
- 高频交互与快速响应
- 规模化生产
- ISO 13485质量体系
- 稳定供货
- 高通量酶筛选
- 发酵与纯化
- 候选原酶支持
- 产学研联动
- 新酶发现
- 定向改造
咳嗽急性期疑似病例快速筛查：核酸提取＋多重qPCR，重点验证低菌量检出、内标和抗抑制能力。
百日咳鲍特菌与相关菌定向鉴别：采用多重qPCR并明确覆盖范围。
变异株、毒力区域或多位点分析：采用多重扩增Panel＋tNGS，关注测序深度和变异判读。
聚集性疫情、传播链或跨区域溯源：按分辨率选择长片段Panel或更广覆盖的基因组方案。
病原明确且重视时效时优先qPCR；复杂样本、多位点分型和溯源可采用tNGS。
不能完全替代。序列证据、活菌培养、抗体结果和临床表现解决的问题不同，应综合解释。
病程延长、抗菌药物使用、采样部位不当、核酸损失和扩增抑制都会降低有效信号，需要全流程质控。
百日咳检测需要兼顾快速发现与后续分型溯源。qPCR适合明确靶标的快速筛查、定向确认和批量监测；tNGS适合相关博德特菌鉴别、疫苗相关抗原基因变化监测、分型位点覆盖和公共卫生溯源。以qPCR承担前线检测、以tNGS承担深度分析，再与培养、血清学及流行病学资料综合验证，可形成更清晰的分层路径。
| 产品类型 | 产品功能 | 产品名称 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 核酸提取 | 提取试剂盒 | MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒 | 18306ES |
| 核酸提取仪 | 96通道自动化核酸提取仪 | 80510ES | |
| qPCR Mix | 四代快速、低残留、全预混 | Hieff Unicon® Universal Superfast qPCR Mix（One Tube） | 16924ES |
| 三代全预混、低残留 | Hieff Unicon® Pure Pro U+ qPCR Mix（One Tube） | 16713ES | |
| 三代通用全预混 | Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix（One Tube） | 16710ES | |
| 二代全预混（5×浓度） | Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus） | 13891ES | |
| 一代全预混 | Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) | 13171ES | |
| 耐抑制性强 | Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix | 11211ES/11212ES | |
| 高灵敏、可冻干 | Hifair Unicon® Lyo-Ready I TaqMan Multiplex qPCR Mix (UDG plus) | 11893ES |
| 产品类型 | 产品功能 | 产品名称 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 核酸提取 | 提取试剂盒 | MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒 | 18306ES |
| 核酸提取仪 | 96通道自动化核酸提取仪 | 80510ES | |
| 一步法逆转录试剂盒 | 一步法逆转录多重扩增 | Hieff® Multiplex RT-PCR Kit多重RT-PCR 试剂盒 | 12950ES |
| 长片段一步法逆转录多重扩增 | Hieff® AccuLong Onestep Multiplex RT-PCR kit | 13315ES | |
| 多重扩增试剂 | 长片段多重扩增 | 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix 2.0 4×多重PCR 预混液 | 12977ES |
| 超多重扩增 | 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix 4×多重PCR 预混液 | 12948ES | |
| 逆转录试剂 | 预混版逆转录 | Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Mix一链cDNA合成预混液 | 12958ES |
| 基础版逆转录 | Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Mix 一链cDNA合成预混液 | 12946ES | |
| 核酸清除剂 | 气溶胶核酸清除 | Non-Corrosive Nucleic Acid Remover无腐蚀核酸清除试剂 | 19710ES |
