病原解决方案 | 乙型肝炎检测怎么选？荧光定量PCR与tNGS双技术路径及原料解决方案
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2026-07-23
据世界卫生组织及《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》相关数据，我国仍是乙型肝炎负担较重的国家之一。随着恩替卡韦、替诺福韦等抗病毒药物广泛应用，HBV DNA持续低于检测下限和临床治愈成为重要管理目标。
乙型肝炎检测怎么选技术？常规筛查和诊疗主要依靠乙肝血清学标志物及HBV DNA定量。对明确HBV靶标进行低病毒载量检测、疗效评价、病毒学突破确认和批量监测时，荧光定量PCR仍是优先路线；当需要分析聚合酶/逆转录酶区域耐药突变、HBV基因型、低频变异或复杂病毒准种时，可采用靶向tNGS提供序列层面的补充信息。
tNGS不应替代常规HBV DNA定量。其价值主要体现在既往用药史复杂、治疗反应不佳、疑似耐药、病毒学突破及分子流行病学研究等场景。
【原料解决方案】针对HBV检测，翌圣生物提供从病毒核酸提取、荧光定量qPCR扩增、病原tNGS多重扩增建库到tNGS RDC定制开发的原料支持，帮助疾控、检测机构及IVD企业围绕低病毒载量定量、隐匿性感染筛查、抗病毒治疗监测和耐药变异分析搭建完整流程。
在HBV DNA定量或tNGS建库前，可根据血清、血浆等样本类型、起始体积、目标检测下限和自动化通量，在通用病毒核酸提取与病原核酸提取方案中开展验证。对于10–20 IU/mL等级的低病毒载量检测目标，提取效率、洗脱体积和抑制物残留会直接影响体系灵敏度。
HBV DNA定量是抗病毒治疗启动、疗效评价、病毒学应答和停药后复发监测的重要指标。对于隐匿性感染、治疗后低水平病毒血症及病毒学突破，体系需要同时关注低拷贝灵敏度、扩增效率、线性范围、重复性、耐抑制性和污染控制。
通用型全预混、高灵敏并支持快速扩增的多重qPCR预混液，适合大批量HBV DNA检测及缩短周转时间的应用。
通用型高灵敏、防污染多重qPCR预混液，适合关注低残留和扩增产物污染控制的体系开发。
可冻干的快速qPCR预混液，适合需要常温运输、长期储存或现场检测产品形态的开发方向。
HBV具有较高遗传变异性，患者体内可能同时存在多种病毒准种。长期药物选择压力下，低频耐药变异可能逐渐扩增并导致病毒学突破。靶向tNGS可围绕HBV聚合酶/逆转录酶等关键区域设计Panel，同步分析核苷（酸）类似物相关耐药突变、病毒基因型、低频变异和复杂突变组合，为既往用药史复杂或治疗反应不佳患者提供更完整的序列依据。
Hieff® Multiplex RT-PCR Kit（一步法RT-mPCR试剂，低背景菌版本）（Cat#12950）：将逆转录与第一轮扩增合并，多重扩增后可直接衔接测序。对于HBV DNA靶向项目，应根据模板类型验证是否直接采用多重PCR扩增；该产品同时可支持包含RNA病原的联合Panel开发。
Hieff® AccuLong Onestep Multiplex RT-PCR Kit（Cat#13315）：扩增片段可达2 kb，适合长片段覆盖和三代测序方向；用于HBV项目时可围绕聚合酶区或更长基因组区域进行体系适配。
Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Mix 一链cDNA合成预混液：稳定预混、操作便捷，热启动逆转录酶可在20 min完成实验，适用于含RNA靶标的联合病原Panel。
4× Hieff® Multiplex PCR Master Mix 2.0多重PCR预混液（Cat#12977）：支持2000 bp以内不同片段长度的多重扩增，优化缓冲体系有助于提高低浓度模板检测灵敏度，并具有较好的加速及冻融稳定性。
tNGS RDC（Research Development Center）可根据企业客户需求提供HBV耐药Panel或全长/长片段方案设计、原料筛选、引物池调试、均一性优化、返样验证和产品定型支持，并持续供应定制原料。
- 定制化IVD原料开发
- 分子诊断体系开发经验
- 高频交互与快速响应
- 高通量酶筛选与测试
- 发酵、纯化和分子酶研发
- 定制项目候选原酶支持
- 产学研联动
- 新酶发现与酶进化
- 定向改造与原料资源积累
- 转产放大与规模化生产
- ISO 13485质量体系管理
- 产能、品质及成本控制
HBV DNA定量、低病毒载量、隐匿性感染或疗效监测：优先评估病毒核酸提取＋荧光定量qPCR路线。
疑似耐药、病毒学突破、复杂用药史或低频变异分析：在标准HBV DNA定量基础上增加靶向tNGS。
分子流行病学、基因型或长片段研究：根据覆盖区域和测序平台选择短片段高多重或长片段扩增方案。
IVD产品研发：分别验证qPCR的定量性能，以及tNGS的Panel覆盖、扩增均一性、变异检出限和生信分析准确性。
常规HBV DNA定量和治疗监测优先使用qPCR；耐药位点、基因型、低频变异或复杂病毒准种分析可使用靶向tNGS。
不能。两者的检测目的和结果表达不同。qPCR用于标准化病毒载量定量，tNGS用于序列和变异分析。
样本起始量、核酸回收率、洗脱体积、抑制物残留、引物探针设计及仪器阈值设置都会影响低拷贝检出，应在完整流程中验证LoD和重复性。
HBV检测需要根据病毒载量定量、疗效监测、隐匿性感染、耐药分析和分子流行病学等不同目标选择技术路线。荧光定量qPCR适合低病毒载量的快速、灵敏和标准化定量；靶向tNGS适合耐药突变、基因型、低频变异及复杂病毒准种分析。翌圣生物提供从病毒核酸提取、qPCR扩增到tNGS多重扩增建库和RDC定制开发的原料支持，帮助检测机构与IVD企业构建更完整的乙型肝炎分子检测方案。
| 产品类型 | 产品功能 | 产品名称 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 核酸提取 | 提取试剂盒 | MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒 | 18306ES |
| 核酸提取仪 | 96通道自动化核酸提取仪 | 80510ES | |
| qPCR Mix | 四代快速、低残留、全预混 | Hieff Unicon® Universal Superfast qPCR Mix（One Tube） | 16924ES |
| 三代全预混、低残留 | Hieff Unicon® Pure Pro U+ qPCR Mix（One Tube） | 16713ES | |
| 三代通用全预混 | Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix（One Tube） | 16710ES | |
| 二代全预混（5×浓度） | Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus） | 13891ES | |
| 一代全预混 | Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) | 13171ES | |
| 耐抑制性强 | Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix | 11211ES/11212ES | |
| 高灵敏、可冻干 | Hieff Unicon® Lyo-Ready I TaqMan Multiplex qPCR Mix (UDG plus) | 11893ES |
| 产品类型 | 产品功能 | 产品名称 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 核酸提取 | 提取试剂盒 | MolPure® Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit 磁珠法病原DNA/RNA提取试剂盒 | 18306ES |
| 核酸提取仪 | 96通道自动化核酸提取仪 | 80510ES | |
| 一步法逆转录试剂盒 | 一步法逆转录多重扩增 | Hieff® Multiplex RT-PCR Kit 多重RT-PCR试剂盒 | 12950ES |
| 长片段一步法逆转录多重扩增 | Hieff® AccuLong Onestep Multiplex RT-PCR Kit | 13315ES | |
| 多重扩增试剂 | 长片段多重扩增 | 4× Hieff® Multiplex PCR Master Mix 2.0 4×多重PCR预混液 | 12977ES |
| 超多重扩增 | 4× Hieff® Multiplex PCR Master Mix 4×多重PCR预混液 | 12948ES | |
| 逆转录试剂 | 预混版逆转录 | Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Mix 一链cDNA合成预混液 | 12958ES |
| 基础版 | Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Mix 一链cDNA合成预混液 | 12946ES | |
| 核酸清除剂 | 气溶胶核酸清除 | Non-Corrosive Nucleic Acid Remover 无腐蚀核酸清除试剂 | 19710ES |
