推荐应用
本品是一款采用公司新一代抗体法热启动 Taq 酶的多重荧 光定量 qPCR 预混液。
依托翌圣生物 ZymeEditor™酶改造平台，研究人员基于 DNA 聚合酶的结构解析与多来源酶序列比对，通过定点诱变、随机突变定向筛选、压力测试及酶蛋白片段重组等多种技术手段，对 Taq DNA 聚合酶进行全方位定向改造，获得了一系列优势突变体。接着，团队借助 MTPS 高通量筛选技术，从热稳定性、亲和力、聚合活性、外切活性等多维度筛选后，针对直扩等终端应用场景，进一步拆解影响酶活性的关键因素，优化筛选压力，最终改造出抑制物耐受性较强、持续合成速度快的Taq DNA聚合酶。针对该定向进化、改造的Taq DNA聚合酶，分子诊断试剂关键原料研发平台对荧光定量PCR反应体系进行优化，通过大量真实临床样本测试、市面上同类试剂对比，经过不断的体系优化、调整、验证，正式推出这款专为非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时也可接受含非洲猪瘟病毒引物探针的成品试剂盒的定制合作。
适配性——针对非洲猪瘟病毒核酸检测优化，尤其适配宏石、天隆荧光定量 PCR 仪
灵敏度——上百例临床样本检测，检出率、灵敏度优于市面同类产品
快速——20min即可出结果
稳定性——预混引探37℃放置7天，反复冻融20次性能稳定
dUTP/UDG防污染体系——引入了dUTP/UDG防污染系统，可有效防止气溶胶污染
1、非洲猪瘟真实样本检测
| 仪器 | 天隆 | 体系 | 25 μL总体系，其中模板5uL |
| 模板 | 真实临床样本 | 模板浓度 | 检测Ct值如下 |
| 引物探针 | 非洲猪瘟病毒引物探针 | 前处理 | 猪场磁珠法大规模提取的核酸 |
| 扩增程序 | 95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min | ||
图1. 45例非洲猪瘟临床样本检测扩增曲线
表1. 45例非洲猪瘟临床样本检测Ct值统计
结果：使用市面上同类针对非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时检测45例临床样本，结果显示，翌圣16967检测非洲猪瘟病毒的检出率更高、荧光值更高、低浓度检出效果更好。
2、灵敏度检测
| 仪器 | 天隆 | 体系 | 25 μL总体系，其中模板5uL |
| 模板 | 真实临床样本 | 模板浓度 | 梯度稀释到检测限浓度 |
| 引物探针 | 非洲猪瘟病毒引物探针 | 前处理 | 猪场磁珠法大规模提取的核酸 |
| 扩增程序 | 95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min | ||
表2 不同厂家qPCR预混液非洲猪瘟病毒检测灵敏度测试
结果：使用市面上同类针对非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时检测两例梯度稀释到检测限浓度的非洲猪瘟病毒核酸，结果显示，翌圣16967检测非洲猪瘟病毒的灵敏度、Ct值比市面上同类产品略有优势。
3、稳定性测试
| 仪器 | 天隆 | 体系 | 25 μL总体系，其中模板5uL |
| 模板 | 非洲猪瘟病毒阳性对照 | 模板浓度 | 阳性对照、灵敏度浓度 |
| 引物探针 | 非洲猪瘟病毒引物探针 | 前处理 | 磁珠法提取 |
| 扩增程序 | 95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min | ||
图2. 16967预混非洲猪瘟病毒引物探针在37℃放置7天稳定性测试
结果：将16967预混非洲猪瘟病毒引物探针在37℃放置7天，与-20℃正常保存的试剂，同时扩增非洲猪瘟病毒阳性对照、灵敏度浓度核酸、NTC，结果显示两者检测峰形、Ct值、检出率无显著差异，且热加速后没有非特异性扩增，产品全预混稳定性良好。
-25~-15℃保存，有效期18个月。
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