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Robust PCR master mix——提升PCR成功率，大幅减少扩增时间
Robust PCR master mix——提升PCR成功率，大幅减少扩增时间
7661
2022-11-17
研发背景
Hieff® Robust PCR Master Mix是一款高检出率型PCR预混液，通过酶结构的改造、筛选及Buffer的优化，解决了常规PCR Mix检出率低、产量低的问题。另外，延伸速度提升至15-30 s/kb，可用于基因的快速克隆。
产品描述
Hieff® Robust PCR Master Mix是预混PCR反应所需的各类组分的预混液，仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。因采用酶工程改造筛选的强力型Taq酶和高效扩增Buffer，该产品的扩增检出率大大提升，可解决绝大多数PCR反应。
产品特点
○ 扩增速度达15-30 s/kb，极限速度5 s/kb
○ 扩增长度1-4 kb
○ 模板适用性广
○ 靶基因GC耐受范围35-70%
产品数据
1.延伸速度30s/kb，极限延伸速度5s/kb
图1：以小鼠基因组为模板，不同延伸速度（5 s/kb-60 s/kb）扩增2 kb大小的片段。PCR结束后取4 μL进行电泳检测。a为Hieff® Robust PCR Mix，b-d为其他品牌普通型PCR Mix，e为快速型PCR Mix。Marker:1 kb DNA ladder。
2.扩增长度4kb，扩增时间更短
图2：以小鼠基因组为模板，分别扩增1-4 kb的目的片段，PCR反应条件使用各公司推荐的PCR反应条件，PCR反应结束后，取4 μL进行电泳检测。Marker:1 kb DNA ladder。
3.适用于动植物基因组及菌落PCR实验
图3：以人基因组DNA（1）、拟南芥基因组DNA（2）、水稻基因组DNA（3）、小鼠基因组DNA（4）、菌液（5）、质粒DNA（6）为模板，30s/kb延伸速度条件下分别扩增大小为0.5 kb、1 kb、2 kb、4 kb的片段，PCR结束后取4uL进行电泳检测。Marker:1kb DNA ladder。
产品应用
基因快速克隆、菌落PCR、TA克隆等。
FAQ
Q：产品保质期、运输问题
A：冰袋运输。-20℃，保质期2年。
Q：该产品扩增的PCR产物可用于PAGE胶电泳吗？
A：不可以。
Q：该产品可以用于扩增鼠尾、植物裂解液等粗制模板吗？
A：推荐10108 Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix（With Dye) 用于粗制模板的扩增。
Q：出现非特异性扩增的解决方案？
A：理论上，采用该产品的建议扩增条件，可以解决大部分基因扩增。当出现非特异性扩增时，可尝试将退火温度梯度上升2℃解决。
Protocol
以小鼠DNA扩增1kb基因举例说明：
体系配制
|
组分 |
体积 |
终浓度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
|
模板DNA |
50 ng |
- |
|
Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
|
Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
|
2×HieffTM HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) |
25 μL |
1× |
反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
10 sec |
30 |
|
退火 |
55℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
订购信息
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
10106ES03 |
1 mL |
|
|
10106ES08 |
5 mL |
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
|
10102ES08 |
5 mL |
|
|
10108ES08 |
5 mL |
|
|
10148ES60 |
100 U |
了解翌圣
翌圣生物科技(上海)股份有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是一家致力于分子酶原料及其相关试剂盒研发、生产的高新技术型企业。公司总部设在上海国际医学园区，在全国（近）一线城市设有办事处和仓储物流，兼之健全的代理商体系，服务于全国各级科研单位、体外诊断和第三方检测机构、生物医药公司等2.5万家客户。
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