本试剂盒包含组织快速裂解试剂和扩增试剂，可直接对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肝脏、肾脏等）样本进行裂解，快速释放基因组DNA，还可兼容血液、细胞悬浮液等样本，裂解产物的上清液可直接加入到 PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，2~5 mm²鼠耳或肝脏、1~5 mm鼠尾、1~2个脚趾均可进行实验。

本试剂盒提供的 2× Hieff® Tissue Direct PCR Mix（With Dye）为 2倍浓度的PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率，可广泛扩增10 Kb及以内的片段。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

• 直扩片段长：最长可直扩10 kb片段。
• 快速延伸：5-10秒/kb延伸速度，省时高效。
• 耐受性好：裂解液投入量可达到扩增体系20%。
• 裂解灵活：95℃3分钟裂解/60℃15分钟裂解。
• 多重扩增：至多可满足5-7重扩增。
• 稳定可靠：试剂盒&裂解产物稳定性好。

• 可满足10 kb以内的小鼠直扩

▲可满足10kb以内的小鼠直扩。分别裂解鼠尾、鼠耳、鼠趾和鼠肾，取1 μL 裂解产物扩增1~10 kb片段。其中翌圣10191ES采用95℃高温3分钟裂解，5-10 sec/kb的延伸速度进行扩增，其他品牌采用各自对应说明书进行反应。数据结果显示10191ES在快速裂解和快速扩增的情况下，可保证10kb以内的片段扩增。

• 覆盖30%-70%GC含量的片段

▲可满足10kb以内不同GC含量片段的小鼠直扩。取1 μL 裂解产物扩增1~10 kb中不同GC含量的片段。数据结果显示10191ES可满足10kb以内不同GC含量的片段扩增，GC含量覆盖范围为30%-70%。

• PCR耐受性好

▲耐受性好。分别取95℃高温3分钟裂解后的不同体积裂解产物扩增1~10 kb片段，PCR扩增体系为20 μL，5-10 sec/kb的延伸速度进行扩增。数据结果显示PCR组分对裂解液有优秀的耐受性，裂解液投入量可达到扩增体系的20%。

• 裂解产物多重扩增

▲裂解产物可满足7重扩增。取95℃高温3分钟裂解后的裂解产物进行7重引物扩增，PCR扩增体系为25 μL，5 sec/kb的延伸速度进行扩增。数据结果显示翌圣10191ES可扩增500 bp~5 kb的7重条带。

• 裂解产物稳定性好

▲鼠组织裂解产物稳定性好。取裂解的鼠尾上清液保存于25℃恒温箱和4℃冰箱中4周，PCR扩增检测1~10 kb片段。数据结果显示相比新鲜裂解液，裂解产物在保存一段时间后，仍能够保证扩增检出。

• 试剂盒稳定好

▲试剂盒稳定性好。将10191ES全套试剂盒保存于25℃恒温箱和4℃冰箱中4周，37℃恒温箱中2周。PCR扩增检测1~10 kb片段。数据结果显示试剂盒稳定性好，仍能够保证扩增检出。

未开封状态下，-25~-15℃保存，有效期1年。

开封后A、B组分4℃保存，有效期1年。若长时间多次使用，请分装后储存，避免交叉污染。

开封后C组分-25~-15℃保存，避免反复冻融，有效期1年。

1. 电泳条带弱（扩增产量低）

1）引物：优化引物设计；

2）退火温度：设置退火温度梯度，找到合适的退火温度；

3）引物浓度：适当提高引物浓度；

4）延伸时间：适当增加延伸时间至10 sec/kb；

5）循环数：增加循环数至36~ 40个循环；

6）模板量不足：样本裂解不彻底导致DNA释放量少，可适当延长裂解时间至20min或提高裂解温度至95℃。

2. 有杂带或弥散条带

1）引物设计问题：引物错配导致扩增特异性差，需重新设计引物，可以先用精提模板扩增，验证引物设计的合理性；

2）退火温度：尝试提高退火温度并设置退火温度梯度；

3）引物浓度：适当降低引物浓度；

4）循环数：减少循环数至25~30个循环；

5）模板降解：更换高质量模板。

3. 产物堵胶孔

1）清洁实验环境，避免气溶胶污染；

2）模板使用量：降低模板使用量；

3）循环数：减少循环数至25~30个循环；

4）退火温度：设置退火温度梯度，摸索最佳退火温度。