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Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物组织直接PCR试剂盒
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产品介绍

Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)植物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA,不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等,即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外,样品使用量少,低至1 mm植物叶片即可进行实验。

本试剂盒中提供的2× Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。且含有示踪染料,PCR产物可直接电泳。

该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。

产品特色
  • 适应性广、稳定性强
应用案例
  • 多类型植物样本验证

不同类型植物叶片直扩结果。M:100 bp DNA ladder。C:相应植物纯化基因组DNA为模板。1-2:叶片组织裂解产物为模板。循环数:30个循环。

存储条件

1. 试剂10187-A【Buffer P1】,置于2-8℃保存。有效期1年。

2. 试剂10187-B【Buffer P2】,中和裂解产物,利于更长时间保存样本,置于2-8℃保存。有效期1年。

3. 试剂10187-C【2 × Plant Master Mix】,-25~-15℃保存,避免反复冻融。有效期1年。

试剂盒有效期1年。

FAQ
常见问题可能原因解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。PCR反应体系或反应条件不合适。使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
PCR试剂保存不当失去活性。2×PCR Mix应保存于-25~-15℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在2-8℃短时间存放。
引物设计问题。尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。使用新鲜的试剂。
裂解液、中和液加入比例不当,裂解混合液影响PCR体系的pH值。正常条件下,中和后的裂解混合液的pH应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照5:1的量进行中和)。
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。裂解混合液可在2-8℃保存5天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
模板加入量不适合。在反应体系<5%范围内优化模板加入量。
PCR循环数不足。适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。提高PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
PCR引物错配。重新设计PCR引物。
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带操作工具或试剂污染。实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
样本间交叉污染。每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。


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