本试剂盒可直接快速地对小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾等)样本进行PCR扩增,具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液,可以快速裂解样品,释放基因组DNA。裂解产物可以直接加入到PCR反应体系中,无需精提纯化,操作方便。此外,本试剂盒对样品投入量要求低,2-5 mm2鼠耳或肝脏、1-5 mm鼠尾、1-2个脚趾均可进行实验。
本试剂盒提供的2× Hieff® Tissue Direct PCR Mix为2倍浓度的热启动PCR反应液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。
- 扩增速度快
- 支持5重PCR扩增
- GC兼容性强
- 裂解效率超高
- 广泛的物种适配性
- 扩增效率高(长度、速度、GC兼容性)
Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus对不同组织裂解产物进行扩增。裂解条件:70℃裂解10min,95℃失活5min。目的片段分别为1kb,2kb,3kb,6kb,延伸时间分别设置3,5,10,20 s/kb,Marker为10510ES60 (Yeasen).
- 裂解时间短
使用Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus对鼠耳组织进行裂解,时间设置5-30 min,并扩增不同大小的目的片段,均能获得很好的扩增产物,Marker为10510ES60 (Yeasen).
- 广泛的模板兼容性
使用Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus直接裂解(70℃裂解10min)扩增人293细胞、唾液、头皮组织,均有明显的目的条带,Marker: 10510ES60 (Yeasen).
- 基因分型检测对比
取不同组织裂解产物进行多重PCR扩增,五对引物片段大小分别为200bp、400bp、600bp、800bp、1000bp,Marker:Yeasen 10501ES60。
1. 组分A:2-8℃保存,有效期1年。若长时间多次使用,请分装后储存,避免交叉污染。
2. 组分B/C:-20℃保存,避免反复冻融。有效期1年。
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× Mouse Direct PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系,或减少裂解液的用量。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系1-10%范围内优化模板加入量。 | |
PCR循环数不足。 | 增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |