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Xanthine Oxidase Assay Kit, Colorimetric Method 黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒,比色法
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60427ES50
50 T
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产品介绍

本试剂盒采用比色法测定样本中的黄嘌呤氧化酶含量,测定原理如下:黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤,同时产生超氧阴离子自由基。当存在电子受体及显色剂时,生成紫红色结合物,通过测定紫红色结合物的生成量来计算XOD的活力。

该方法的优点包括快速简便,重复性强,适用于动物血液、组织、各种体液、细胞等的黄嘌呤氧化酶(XOD)测定。

产品信息

货号60427ES50
规格50 T
检测范围0-71.9 U/L

组分信息

组分编号组分名称装量储存条件备注
60427ES-A试剂一20 mL液体2瓶-25~-15℃Part1
60427ES-B试剂二5 mL2~8℃Part2
60427ES-C试剂三6 mL液体2瓶2~8℃避光Part2
60427ES-D试剂四粉剂2支,稀释液2支-25~-15℃Part1
60427ES-E试剂五60 mL2~8℃Part2

备注:

建议60427ES-A试剂一和60427ES-D试剂四放于-25~-15℃保存。

试剂一需室温或37℃预温后使用。

试剂四的溶解:临用前取试剂四稀释液1支,稀释试剂四粉剂1支,稀释好溶液-25~-15℃保存,尽量避免反复冻溶。

试剂四粉剂量较少,可能会附着于管壁或盖子内,可4000转/分,离心2分钟后再用稀释液溶解。

产品特色

应用案例

使用说明

1.仪器试剂准备

含530 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿、37℃恒温水浴或气浴箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理压水(0.9%)或 PBS(0.1 M)、涡旋混匀器、一次性塑料试管(或离心管)、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1)血清/浆

血清可直接取样进行检测;血浆需以3000~3500转/分,离心10分钟,小心吸取澄清的上清进行检测,弃去上层脂肪与下层沉淀,若仍有混浊可反复离心。

2)红细胞

抗凝全血以1000转/分,离心10分钟,弃上层血清,取下层红细胞按1︰49的比例加双蒸水制成溶血液待测。配好的溶血液最好当天做检测,2~8℃存放时间不超过8小时。

3)组织

准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水),冰水浴条件下,机械匀浆,制备成10%的匀浆液,2500~3000转/分钟,离心10分钟,取上清液进行测定。

3.操作表

试剂空白管测定管
蒸馏水(mL)a*-
样品(mL)-a*
试剂一(mL)11
试剂二(mL)0.050.05
试剂三(mL)0.20.2
试剂四(mL)0.020.02
混匀,37℃水浴20分钟
试剂五(mL)1.01.0
混匀,530 nm,1 cm光径,双蒸水调零,测各管吸光度值

参考取样量(a*): 血清50~100 μL;1︰49溶血液50 μL;10%肝组织匀浆20~100 μL。

4.计算公式

1)血清/浆XOD活力计算:

定义:每升血清/浆在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。

计算公式:血清XOD活力(U/L)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)]

2)溶血液XOD活力计算:

定义:每克血红蛋白在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。

计算公式:溶血液XOD活力(U/gHb)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)] ÷ CHb

3)组织XOD活力计算:

定义:每克组织蛋白在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。

计算公式:组织中XOD活力(U/gprot)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)] ÷ Cpr

其中,ε:表示呈色物消光摩尔系数,12.6×10-3;V反总:表示反应液总体积,(2.27+a) mL;V样:表示取样量,mL;

T:表示反应时间,20 分钟;d:表示为比色光径,1 cm;CHb:表示血红蛋白含量,gHb/L;Cpr:表示匀浆蛋白含量,gprot/L。


存储条件

2~8℃保存,有效期3个月。

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