本试剂盒采用比色法测定样本中的黄嘌呤氧化酶含量,测定原理如下:黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤,同时产生超氧阴离子自由基。当存在电子受体及显色剂时,生成紫红色结合物,通过测定紫红色结合物的生成量来计算XOD的活力。
该方法的优点包括快速简便,重复性强,适用于动物血液、组织、各种体液、细胞等的黄嘌呤氧化酶(XOD)测定。
产品信息
货号 | 60427ES50 |
规格 | 50 T |
检测范围 | 0-71.9 U/L |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 装量 | 储存条件 | 备注 |
60427ES-A | 试剂一 | 20 mL液体2瓶 | -25~-15℃ | Part1 |
60427ES-B | 试剂二 | 5 mL | 2~8℃ | Part2 |
60427ES-C | 试剂三 | 6 mL液体2瓶 | 2~8℃避光 | Part2 |
60427ES-D | 试剂四 | 粉剂2支,稀释液2支 | -25~-15℃ | Part1 |
60427ES-E | 试剂五 | 60 mL | 2~8℃ | Part2 |
备注:
建议60427ES-A试剂一和60427ES-D试剂四放于-25~-15℃保存。
试剂一需室温或37℃预温后使用。
试剂四的溶解:临用前取试剂四稀释液1支,稀释试剂四粉剂1支,稀释好溶液-25~-15℃保存,尽量避免反复冻溶。
试剂四粉剂量较少,可能会附着于管壁或盖子内,可4000转/分,离心2分钟后再用稀释液溶解。
使用说明
1.仪器试剂准备
含530 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿、37℃恒温水浴或气浴箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理压水(0.9%)或 PBS(0.1 M)、涡旋混匀器、一次性塑料试管(或离心管)、蛋白测定试剂。
2.样本前处理
1)血清/浆
血清可直接取样进行检测;血浆需以3000~3500转/分,离心10分钟,小心吸取澄清的上清进行检测,弃去上层脂肪与下层沉淀,若仍有混浊可反复离心。
2)红细胞
抗凝全血以1000转/分,离心10分钟,弃上层血清,取下层红细胞按1︰49的比例加双蒸水制成溶血液待测。配好的溶血液最好当天做检测,2~8℃存放时间不超过8小时。
3)组织
准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水),冰水浴条件下,机械匀浆,制备成10%的匀浆液,2500~3000转/分钟,离心10分钟,取上清液进行测定。
3.操作表
试剂 | 空白管 | 测定管 |
蒸馏水(mL) | a* | - |
样品(mL) | - | a* |
试剂一(mL) | 1 | 1 |
试剂二(mL) | 0.05 | 0.05 |
试剂三(mL) | 0.2 | 0.2 |
试剂四(mL) | 0.02 | 0.02 |
混匀,37℃水浴20分钟 | ||
试剂五(mL) | 1.0 | 1.0 |
混匀,530 nm,1 cm光径,双蒸水调零,测各管吸光度值 |
参考取样量(a*): 血清50~100 μL;1︰49溶血液50 μL;10%肝组织匀浆20~100 μL。
4.计算公式
1)血清/浆XOD活力计算:
定义:每升血清/浆在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。
计算公式:血清XOD活力(U/L)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)]
2)溶血液XOD活力计算:
定义:每克血红蛋白在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。
计算公式:溶血液XOD活力(U/gHb)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)] ÷ CHb
3)组织XOD活力计算:
定义:每克组织蛋白在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为一个酶活力单位。
计算公式:组织中XOD活力(U/gprot)= (A测定-A空白) ÷ ε × (V反总÷V样) × [1 ÷ (T × d)] ÷ Cpr
其中,ε:表示呈色物消光摩尔系数,12.6×10-3;V反总:表示反应液总体积,(2.27+a) mL;V样:表示取样量,mL;
T:表示反应时间,20 分钟;d:表示为比色光径,1 cm;CHb:表示血红蛋白含量,gHb/L;Cpr:表示匀浆蛋白含量,gprot/L。
2~8℃保存,有效期3个月。