本试剂盒采用比色法，通过测定反应体系中产物的吸光度变化来反映酶活性。检测原理如下：甘油三酯和水形成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。底物在脂肪酶作用下发生水解，使胶束分裂，随着胶束的分裂，其对光线的散射能力或浊度会相应下降，降低的速率与脂肪酶活力有关。

本产品适用于检测动物血清/浆、组织等的脂肪酶(LPS)活力。

产品信息

组分信息

备注：底物缓冲液需37℃预温后使用。

使用说明

1.仪器试剂准备

含420 nm 波长的分光光度计、1 cm 光径比色皿、37℃水浴锅、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂(20200ES/20201ES/20202ES)。

2.组织脂肪酶的测定

1）样本前处理：

20％组织匀浆的制备：准确称取组织湿重，按重量（g）︰体积（mL）= 1︰4 的比例，加入4倍体积生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液进行测定。

2）操作过程：

① 将分光光度计于420 nm 处，1 cm光径玻璃比色皿，用Tris 缓冲液调零；

② 将底物缓冲液37℃预温5分钟以上；

③ 往相应编号的试管中加入25 μL 20％的组织匀浆上清液，再加入试剂四25 μL，吸取已预温好的底物缓冲液2 mL冲入试管中，快速混匀，并计时；

④ 迅速倒入比色皿中，在分光光度计420 nm处比浊，30秒时读取吸光度值A1；

⑤ 将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再迅速倒入比色皿中，10分30秒时读取吸光度值A2；

⑥ 求出2次吸光度差值（△A=A1-A2）。

3）计算公式：

组织脂肪酶单位定义：在37℃条件下，每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1 μmol底物为一个酶活力单位。

标准管吸光度的计算：取底物缓冲液2 mL加生理盐水50μL，420 nm 处比浊，读取吸光度值AS值，此AS值相当于标准管（454 μmol/L）的浓度的吸光度值。

组织LPS活力（U/gprot）=(A1−A2)/AS × C标准 × (V反总/V样) ÷ T ÷ Cpr

其中，C标准：表示标准浓度，454 μmol/L；V反总：表示反应液总体积，2.05 mL；V样：表示样本取样量，0.025 mL；T：表示反应时间，10分钟；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，gprot/L（prot 指蛋白）。

3.血清/浆脂肪酶的测定

1）操作过程：

① 将分光光度计于420 nm 处，1 cm光径玻璃比色皿，用Tris缓冲液调零；

② 将底物缓冲液37℃预温5分钟以上；

③ 往相应编号的试管中加入50 μL血清/浆，吸取已预温好的底物缓冲液2 mL加入试管中，快速混匀并计时；

④ 迅速倒入比色皿中，在分光光度计420 nm处比色，30秒时读取吸光度值A1；

⑤ 将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再迅速倒入比色皿中，10分30秒时读取吸光度值A2；

⑥ 求出2次吸光度差值（△A=A1-A2）。

2）计算公式：

血清/浆脂肪酶单位定义：在37℃条件下，每升血清/浆在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1 μmol底物为一个酶活力单位。

标准管吸光度的计算：取底物缓冲液2 mL加生理盐水50 μL，420 nm 处比浊，读取吸光度值AS值，此AS值相当于标准管（454 μmol/L）的浓度的吸光度值。

血清/浆LPS活力（U/L）=(A1−A2)/AS × C标准 × (V反总/V样) ÷ T

其中，C标准：表示标准浓度，454 μmol/L；V反总：表示反应液总体积，2.05 mL；V样：表示样本取样量，0.05 mL；T：表示反应时间，10分钟。

2～8℃避光保存，有效期6个月。