本试剂盒采用比色法测定乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性，测定原理如下：乙酰胆碱酯酶（AChE）水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸。胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB（对称三硝基苯，Sym-Trinitrobenzene）黄色化合物。可根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反映胆碱酯酶的活力。
本产品使用快速简便、稳定性好，适用于检测动物血清/浆、组织等样本中的乙酰胆碱酯酶（AChE）活力。
产品信息
| 货号 | 60422ES50 |
| 规格 | 50 T |
| 检测范围 | 0.01-5.0 U/mL |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 装量 | 储存条件 | 备注 |
| 60422ES-A | 标准品 （1 μmol/mL ） | 粉剂×3支 | 2～8℃ | Part1 |
| 60422ES-B | 底物 | 粉剂×2支 | 2～8℃ | Part1 |
| 60422ES-C | 显色剂贮备液 | 3 mL×1瓶 | 2～8℃避光 | Part1 |
| 60422ES-D | 抑制剂 | 2 mL×1瓶 | 室温 | Part2 |
| 60422ES-E | 透明剂 | 6 mL×1瓶 | 室温 | Part2 |
| 60422ES-F | 生理盐水 | 60 mL×2瓶 | 室温 | Part2 |
备注：
1）标准品使用时每支需加生理盐水10 mL混匀，注意现用现配，配成标准品应用液配制。
2）底物使用时每支粉剂加生理盐水20 mL，制备成底物缓冲液，2～8℃可保存两周。
3）显色剂贮备液使用时需按照显色剂贮备液：生理盐水 = 1︰9稀释，配成显色应用液。按需配制，也可一次配制30 mL，可避光冷藏3个月。
4）透明剂天冷时会有沉淀或混浊，须在37℃加热至透明后方可使用。
使用说明
1.仪器试剂准备
含412 nm 波长的分光光度计、0.5 cm光径比色皿（或酶标仪、96孔板）、37℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。
2.样本前处理
1）组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（mL）= 1:9 的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测（同时取部分上清测定蛋白浓度）。
2）血清/浆：取不抗凝或抗凝全血1000～1500 转/分，离心8分钟，取上层血清/浆，一般测定时将血清或血浆用生理盐水 1︰9 稀释（具体稀释浓度以预实验结果为准）。
3）全血样本：取0.1 mL抗凝全血加双蒸水至10 mL，即按1︰99 稀释，充分混匀。如果样本量少，可以减少取样量。例如取0.01 mL 或0.02 mL 抗凝全血加双蒸水至1 mL或2 mL。取a mL（一般为0.1 mL）进行检测，每个样本取样前必须充分混匀。
3.操作表
| 试剂 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 待测样本（mL） | a* | |||
| 1 μmol/mL 标准品应用液（mL） | a* | |||
| 双蒸水 (mL) | a* | |||
| 底物缓冲液 (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 显色应用液 (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 混匀，37℃准确反应6分钟 | ||||
| 抑制剂 (mL) | 0.03 | 0.03 | 0.03 | 0.03 |
| 透明剂 (mL) | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 待测样本（mL） | a* | |||
| 混匀，室温静置15分钟，波长412 nm，0.5 cm 光径，双蒸水调零，测各管吸光度OD值 | ||||
备注：
1）对照管必须每个样本都做，因为每个样本对照管的吸光度差异较大。
2）比色前试管室温放置15分钟，若室温过低，可能会出现沉淀或混浊，此时，请将试管置于 37℃水浴中片刻，即可澄清，澄清后方可比色，且对实验结果无影响。
3）因反应时间较短，故批量测试时，每批所测样本不可过多，准确控制反应时间，否则会影响实验精确度。
4）a*所表示所取的样品量、标准品量、双蒸水的量，三者均相等：①血清/浆测试前用生理盐水10倍稀释，考取样量为30～50 μL； ②10%脑组织匀浆的参考取样量为30～50 μL；③1:99稀释后的全血稀释液取0.1 mL，取样前每只要摇匀。
4.计算公式
1）组织匀浆中乙酰胆碱酯酶的计算
定义：每毫克组织蛋白在37℃保温6分钟，水解反应体系中1 μmol基质为1个活力单位。
计算公式： 组织AChE活力（U/mgprot）= (A测定−A对照)/( A标准−A空白)×C标准÷Cpr
其中，C标准：表示为标准品浓度，1 μmol/mL；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，mgprot/mL（prot指蛋白）。
2）血清中乙酰胆碱酯酶的计算
定义：每毫升血清样本在37℃保温6分钟，水解反应体系中1 μmol基质为1个活力单位。
计算公式：血清/浆AChE活力（U/mL）= (A测定−A对照)/( A标准−A空白)×C标准×N
其中，C标准：表示为标准品浓度，1 μmol/mL；N：表示样本测试前的稀释倍数。
3）全血中乙酰胆碱酯酶的计算
定义：每毫升全血在37℃保温6分钟，水解反应体系中1 μmol基质为1个活力单位。
计算公式：全血中AChE活力（U/mL）= (A测定−A对照)/( A标准−A空白)×C标准×N 其中：C标准：表示为标准品浓度，1 μmol/mL；N：表示样本测试前的稀释倍数。
2～8℃保存，有效期6个月。
