本试剂盒为葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)测定葡糖糖含量,可以用于不同样本的葡萄糖含量测定。液体样本(参照血清操作和计算方法),固体样本(参照组织、细胞的操作及计算方法),主要用于酶标仪测定葡萄糖含量。
产品信息
线性 | 2.2~15 mmol/L 范围内,R2>0.995。 |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 60408ES60 |
60408-A | 工作液 | 25 mL |
60408-B | 标准品 | 0.1 mL(浓度见标签) |
本产品是一种基于酶法的检测工具,用于定量测定葡萄糖含量。
研究应用:
- 样本处理:样本需按要求处理,避免干扰物质影响检测结果。
- 试剂保存:试剂需在指定条件下保存,避免反复冻融。
- 操作规范:严格按照说明书操作,确保结果准确可靠。
使用说明
- 样本处理
- 血清(或肝素抗凝血浆):直接测定,如超过线性范围用生理盐水推荐(Cat# 60372)稀释后测定。
- 培养液样本:吸取培养液,1000转/分,离心10 min,取上清测定。一般建议细胞密度在100万个/mL以上。
- 组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水(或PBS),冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10 min,取上清液待测。
- 细胞样本:建议收集的细胞密度在100万个/mL以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎完全。
- 细胞收集:将制备好的细胞悬液取出,1000转/分,离心10 min,弃上清液,留细胞沉淀。用等渗缓冲液(推荐Cat# 60152 D-PBS,不含钙、镁离子,1X)清洗1~2次,同样1000转/分,离心10 min,弃上清液,留细胞沉淀;
- 细胞破碎:加入0.2~0.3 mL的匀浆介质(推荐Cat# 60152 D-PBS,不含钙、镁离子,1X)进行匀浆,冰水浴条件下超声破碎(功率 300W,3~5 s/次,间隔30 s,重复3~5次)或手动匀浆,制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采用裂解液裂解(推荐推荐Cat# 20107 Triton X-100, Molecular Biology Grade 曲拉通X-100(分子生物学级),1~2%,裂解30~40 min),裂解好的液体不离心直接测定。
2. 操作表
表1 96孔板加样方法(酶标仪比色测定)
加样种类 | 空白孔 | 标准孔 | 样本孔 |
蒸馏水(μL) | 2.5 | / | / |
标准品(μL) | / | 2.5 | / |
样本(μL) | / | / | 2.5 |
工作液(μL) | 250 | 250 | 250 |
轻轻振荡孔板,37℃孵育10 min,波长505 nm, 酶标仪测定各孔吸光度值。
3. 计算公式
- 血清等液体样本计算公式
酶标仪比色:
C标准:标准品浓度,5.55mmol/L(具体浓度以标签为准)
2. 组织、细胞计算公式(组织、细胞不建议使用生化分析仪测)
蛋白浓度(Cpr,单位 g/L)可使用考马斯亮蓝法、BCA法测定
2~8℃避光保存,有效期1年。
注:样品含量如超出检测范围上限时,可用生理盐水稀释样本后进行测定,测定结果乘以稀释倍数。样本葡萄糖含量较低时可以增加样本取样量(工作液量不变,且最大增加到50 μL,此时空白孔蒸馏水也要增加到相应体积,标准孔标准品量不变,多余的体积加蒸馏水补足,计算时标准品浓度除以相应稀释倍数( )代入计算后测定。
Q:可以检测培养基吗?
A:可以的,但是酚红会有影响,建议做对照扣除,培养基并进行适当的稀释。
Q:该试剂盒的组分A的工作液是否含有酶和显色剂呢?
A:是的。该试剂盒是GOD-POD方法,原理是葡萄糖氧化酶GOD利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸并释放过氧化氢,而过氧化物酶POD在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,该工作液中除含有POD和GOD外,还有色原性氧受体:4-氨基安替比林4-AAP,POD催化4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
Q:可以检测食品中的葡萄糖吗?
A:不推荐用于食品中葡萄糖的检测。