一步法RT-qPCR是常用的RNA分析方法之一。在一步RT-qPCR中，反转录酶和DNA聚合酶预混于同一管内，从而使得在单个反应中就可同时进行反转录和DNA扩增。相比于进行完反转录，准备试剂配制荧光定量反应的两步法而言，一步RT-qPCR更加简单快速，移液步骤更少，污染的风险大大降低，对于高通量实验应用十分适宜。

 

一步法RT-qPCR的优点

 

 

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• 减少污染：一管一步式可防止在反转录和荧光定量PCR阶段之间引入污染物；

• 便捷：移液步骤减少，手动操作时间减少；

• 高通量检测：每个样本获得结果的总时间缩短且可重现性高；

• 灵敏度高：所有产生的第一链cDNA都可用于实时PCR扩增，一定程度上提高灵敏度。

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