Oligo dT 磁珠(19820ES)为表面包被有Oligo dT的1 μm磁性聚合物微球,具有单分散和磁响应性强等特点。磁珠通过Oligo dT与真核生物mRNA的poly A尾结构互补配对,快速高效从总RNA、细胞裂解物和带有poly A的体外转录RNA样本中分离纯化mRNA。纯化的mRNA可用于RT-PCR、cDNA文库构建、RACE、探针杂交和转录组测序等应用。

图1.Yeasen oligdT磁珠镜下观察效果图


应用测试1:从不同量的总RNA中纯化mRNA

图2.Yeasen与国外竞品的 oligdT磁珠纯化的mRNA浓度对比图
结果显示:在20-400μg总RNA/mg磁珠的范围内,YEASEN磁珠和对照纯化的mRNA纯化量相当,是对照的100%-120%。

图3.Yeasen与国外竞品(对照)的 oligdT磁珠纯化的RNA纯度对比图
结果显示:在1μg、10μg和20μg总RNA用量进行mRNA纯化时,RT-qPCR检测actin、18S和28S,YEASEN磁珠的Ct值与竞品相当(控制在0.5 Ct内)。
应用测试2:转录组建库和测序——mRNA的富集

图4.Yeasen(测试)与国外竞品(对照)的 oligdT磁珠纯化的RNA跑胶图
结果显示:YEASEN磁珠和对照磁珠的建库产量和条带分布一致
应用测试3:体外转录(IVT)中mRNA的纯化

图5.Oligo dT 磁珠纯化 IVT mRNA

图6.琼脂糖凝胶电泳图谱-IVT mRNA纯化
结果显示:YEASEN的Oligo dT磁珠和竞品纯化IVT mRNA的效果基本相同。
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
19820ES03/08/50 |
1/5/50 mL |
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12603ES24/96 |
24/96 T |
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常见问题 | 可能原因 | 解决办法 |
磁珠聚集 | 一般在磁珠加入样本的粗提物时,此样本类型中可 能含有长链的DNA,则会导致磁珠聚集,而磁珠的 聚集可能会减少mRNA的产量以及降低最终mRNA的 纯度。 |
首先可以通过移液器吹打,致磁珠分散,使DNA断裂 成小片段,另外也可以将裂解物通过带注射针的注射 器,使样品更加均质化,降低液体的粘性。还可以通 过添加DNase I处理以去除基因组DNA。注意,处理 的样品量过剩时也会导致磁珠聚集,回收量降低,这 时需要考虑减少样品量。 |
rRNA污染消除 | oligo(dT磁珠纯化mRNA过程中,痕量的rRNA污染 也会时有发生,对于后续检测是RT-PCR或者 Northem blotting来说,痕量的rRNA污染不会干扰检 测结果,但是后续应用如果是转录组测序,rRNA的 污染会对测序的数据质量产生影响。 |
如果发生rRNA污染,通常可以通过二次提取可极大提 高rRNA的消除率。在洗涤实验操作过程中,仅通过倒 转混合有时并不能完全混匀充分,一般可通过移液枪 进行混合,使磁珠充分洗净,消除rRNA污染。另外, 对于大部分buffer需要等其恢复至室温后加以使用。 |
mRNA产量较低 | 细胞或组织的mRNA表达水平较低 | 应选择合适的表达时期样本。 |
磁珠与样本的比例太低 | 可适当提高磁珠的量或者减少样本体积,增大样本浓度。 | |
杂交时间过短 | 提高杂交孵育时间到10-15min。 | |
洗脱不充分 | 需要适当提高洗脱液的体积,增加洗脱时间,提高洗 脱温度,也可以重复洗脱两次,然后混合洗脱产物。 |