上新 | T7 DNA Ligase，只连黏性末端的高选择性连接酶

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2026-10-14

DNA连接是分子克隆、NGS文库构建、基因组装与定点突变等分子生物学实验的核心基础步骤。在酶切消化、接头连接、片段组装等常规实验流程中，体系常不可避免地同时存在平末端与黏性末端片段，而绝大多数实验仅需要特异性完成黏性末端连接。想要在双末端共存的复杂体系中实现精准定向连接、减少平末端干扰，高末端选择性的DNA连接酶是不可或缺的关键工具^[1]。

针对传统连接酶特异性差、易产生非特异连接的实验痛点，翌圣生物全新推出T7 DNA Ligase（Cat#14968ES）。该酶源自 T7 噬菌体，经大肠杆菌重组表达获得，是一款ATP依赖型双链DNA连接酶，该酶可精准催化双链DNA 5´-磷酸基团与3´-羟基基团形成磷酸二酯键；相较于通用性T4、T3 DNA Ligase，T7 DNA Ligase具备极致的末端识别选择性，仅高效催化黏性末端与切刻位点连接，不引发平末端连接反应，从源头规避非特异连接干扰，轻松实现高精准度的定向DNA连接。

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图1. T7 DNA Ligase 工作原理示意图

核心应用场景

基于上述特性，T7 DNA Ligase 可广泛应用于以下应用场景：

定向分子克隆：限制性酶切产生的黏性末端片段可直接定向连入载体。该酶不催化平末端连接，能够减少载体自连与非特异性插入，提升阳性克隆率^[2^]。

NGS 文库构建：用于接头 / 连接子与双链 DNA 的连接，凭借黏性末端专一性降低接头自连背景，让文库构建过程更可控^[2^]。

DNA 切口封闭与环化：高效完成线性双链 DNA 分子内环化，或封闭双链 DNA 单链切口，反应不引入额外碱基序列^[3^]。

Type IIS 酶介导的基因组装：可与 BsaI、BsmBI 等酶搭配用于 Golden Gate 组装，文献报道其四碱基突出端连接保真度优于 T4 DNA Ligase，错配产物更少^[¹^]。

翌圣 T7 DNA Ligase（Cat#14968ES）数据展示

高效连接黏性末端底物，活性媲美进口品牌

图2. 翌圣与进口 Supplier A* T7 DNA Ligase 连接活性对比

注：以 1.25–50 U 的酶量梯度对含黏性末端的 DNA 底物进行连接反应后，经琼脂糖凝胶电泳检测；M 为 DNA Marker，0 为无酶对照，Substrate 1/2 与 Product 1/2 分别为底物与连接产物。

宿主gDNA残留低：< 5 copy / 3000 U

图3. 翌圣 T7 DNA Ligase宿主gDNA残留质控结果

注：使用翌圣E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒（2G）（Cat#41318）对3批次的T7 DNA Ligase进行宿主（E.coli）gDNA残留检测。结果显示3批次gDNA残留量均满足< 5 copy / 3000 U标准，确保了检测结果的可靠性。

核酸外切酶、核酸内切酶与 RNase 残留低

图4. 翌圣 T7 DNA Ligase核酸外切酶 / 内切酶 / RNase 残留检测

注：以未加酶的体系为对照（C），经琼脂糖凝胶电泳检测，翌圣 T7 DNA Ligase与核酸底物孵育后，各体系电泳条带与对照一致，未见明显非特异降解或拖尾现象。

产品推荐

产品名称	产品货号	特性	典型应用
T7 DNA Ligase	14968ES	只催化黏性末端与切刻连接、不催化平末端	黏性末端定向克隆、连接子/接头连接、线性 DNA 环化、切刻连接、黏性末端基因组装

系列产品推荐，适配全场景实验需求

为满足不同实验场景下的连接酶需求，翌圣生物提供完整的连接酶产品矩阵，适配分子克隆、文库构建、基因编辑等多元应用，一站式解决科研痛点。

产品名称	产品货号	特性	典型应用
T7 DNA Ligase	14968ES	只连黏性末端与切刻，不连平末端	黏性末端定向克隆、接头连接、线性 DNA 环化、基因组装
HiSalt T4 DNA Ligase	14967ES	耐盐 T4 DNA Ligase，高盐下仍保持高活性	高盐体系连接、限制酶切片段直接连接、NGS 文库构建、分子克隆
Premium T4 DNA Ligase	14966ES	高热稳定 + 低接头自连率	分子克隆、测序文库构建
T3 DNA Ligase	14965ES	对高修饰寡核苷酸容忍度高	分子克隆、文库构建、ASO 药物合成
Hieff® Taq DNA ligase	14957ES	耐高温、仅连接完全互补片段、保真度高	连接介导 PCR、Gibson Assembly、高温 DNA 片段串联
E.coli DNA Ligase	14955ES	NAD 依赖，专攻粘性末端连接	甲基化建库、cDNA 克隆
Hieff® 5' App T4 DNA ligase	14960ES	预腺苷化接头连接，片段自连少	NGS 建库中 RNA 或单链 DNA 接头连接
PBCV DNA Ligase	14962ES	RNA 指导的单链 DNA 连接	原位测序、单链 DNA 连接
T4 RNA ligase 1	14651ES	连接单链 RNA 或 DNA，ATP 依赖	miRNA 建库、RNA 环化
T4 RNA ligase 2	14652ES	高效连接双链 RNA 缺口	RNA 分子间连接、RNA 环化
T4 RNA ligase 2, truncated KQ	14653ES	无需 ATP，减少片段自连	miRNA 建库（3′ 端接头连接）
T4 RNA ligase 2, truncated K227Q	14655ES	无需 ATP，减少片段自连	miRNA 建库（3′ 端接头连接）

参考文献

[1] Potapov V, Ong J L, Kucera R B, et al. Comprehensive profiling of four base overhang ligation fidelity by T4 DNA ligase and application to DNA assembly[J]. ACS Synthetic Biology, 2018, 7(11): 2665-2674.

[2] Bauer R J, Zhelkovsky A, Bilotti K, et al. Comparative analysis of the end-joining activity of several DNA ligases[J]. PLoS One, 2017, 12(12): e0190062.

[3] Doherty A J, Ashford S R, Subramanya H S, et al. Bacteriophage T7 DNA ligase: overexpression, purification, crystallization, and characterization[J]. Journal of Biological Chemistry, 1996, 271(19): 11083-11089.

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