本试剂盒测定原理如下：抗坏血酸过氧化物酶（APX）催化抗坏血酸（ASA）与过氧化氢（H2O2）反应，使ASA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDASA），随着AsA被氧化，溶液中290 nm波长下的吸光度值（A290）下降，根据单位时间内A290减少值，计算抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性。
产品信息
| 货号 | 60435ES50 |
| 规格 | 50 T |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 装量 | 储存条件 |
| 60435ES-A | 试剂一 | 100 mL×1瓶 | 2℃～8℃ |
| 60435ES-B | 试剂二 | 1瓶 | 2℃～8℃ |
| 60435ES-C | 试剂三 | 5 mL×1瓶 | 2℃～8℃ |
备注：
试剂二应用液：试剂二加入5 mL双蒸水充分溶解。
使用说明
1.仪器试剂准备
低温离心机、紫外分光光度计、1 cm光径石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
2.粗酶液提取
按组织质量（g）：缓冲液体积（mL）= 1:9的比例加入试剂一（如0.1 g组织加入0.9 mL缓冲液），冰水浴匀浆，10000转/分，离心10分钟，取上清待测。
3.操作表
测定之前将双蒸水及试剂一在37℃中预热30 min 以上。
| 试剂 | 空白管 | 测定管 |
| 双蒸水(μL) | 100 | - |
| 样本(μL) | - | 100 |
| 试剂一(μL) | 700 | 700 |
| 试剂二应用液(μL) | 100 | 100 |
| 试剂三(μL) | 100 | 100 |
| 迅速混匀，双蒸水调零，波长290 nm，1 cm光径石英比色皿，测定10s和130s光吸光度值A0和A1，△A=A0-A1 | ||
备注：①测定之前将双蒸水及试剂一在37℃中预热30 min 以上；②建议分光光度计预热30 min以上，调节波长到290 nm，
双蒸水调零；③建议第二次比色前(120秒左右)将反应液重新倒入试管，充分混匀后再比色(消除反应中产生的气泡干扰)。
4.计算公式
1）按样本蛋白浓度计算：
APX活性(U/mgprot) = (A测定-A空白) ÷ (ε×d) × 10⁶ × V反总 ÷ (V样×T×Cpr)
2）按样本质量计算：
APX活性(U/g组织) = (A测定-A空白) ÷ (ε×d) × 10⁶ × V反总 ÷ (V样×T) × V提 ÷ (W×N)
其中，ε：表示消光摩尔系数(ASA在290 nm处摩尔消光系数为2.8 μmol/mL/cm)；d：表示比色皿光径，1 cm；10⁶：表示1 mol=10⁶ μmol；V反总：表示反应体系总体积，1 mL；V样：表示取样量，0.1 mL；T：表示反应时间，2 min；Cpr：表示待测样本蛋白质浓度(mgprot/mL)，需另外测定；V提：表示提取液总体积，mL；W：表示样本鲜重，g；N：表示样本测试前稀释倍数。
2～8℃保存，有效期3个月。
