抗坏血酸过氧化物酶(APX)比色法测定试剂盒 Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit(Colorimetric Method)

Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit, Colorimetric Method 抗坏血酸过氧化物酶（APX）测定试剂盒，比色法

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产品介绍

本试剂盒测定原理如下：抗坏血酸过氧化物酶（APX）催化抗坏血酸（ASA）与过氧化氢（H2O2）反应，使ASA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDASA），随着AsA被氧化，溶液中290 nm波长下的吸光度值（A290）下降，根据单位时间内A290减少值，计算抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性。

产品信息

货号	60435ES50
规格	50 T

组分信息

组分编号	组分名称	装量	储存条件
60435ES-A	试剂一	100 mL×1瓶	2℃～8℃
60435ES-B	试剂二	1瓶	2℃～8℃
60435ES-C	试剂三	5 mL×1瓶	2℃～8℃

备注：

试剂二应用液：试剂二加入5 mL双蒸水充分溶解。

产品特色

应用案例

使用说明

1.仪器试剂准备

低温离心机、紫外分光光度计、1 cm光径石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

2.粗酶液提取

按组织质量（g）：缓冲液体积（mL）= 1:9的比例加入试剂一（如0.1 g组织加入0.9 mL缓冲液），冰水浴匀浆，10000转/分，离心10分钟，取上清待测。

3.操作表

测定之前将双蒸水及试剂一在37℃中预热30 min 以上。

试剂	空白管	测定管
双蒸水(μL)	100	-
样本(μL)	-	100
试剂一(μL)	700	700
试剂二应用液(μL)	100	100
试剂三(μL)	100	100
迅速混匀，双蒸水调零，波长290 nm，1 cm光径石英比色皿，测定10s和130s光吸光度值A0和A1，△A=A0-A1

备注：①测定之前将双蒸水及试剂一在37℃中预热30 min 以上；②建议分光光度计预热30 min以上，调节波长到290 nm，

双蒸水调零；③建议第二次比色前(120秒左右)将反应液重新倒入试管，充分混匀后再比色(消除反应中产生的气泡干扰)。

4.计算公式

1）按样本蛋白浓度计算：

APX活性(U/mgprot) = (A测定-A空白) ÷ (ε×d) × 10⁶ × V反总 ÷ (V样×T×Cpr)

2）按样本质量计算：

APX活性(U/g组织) = (A测定-A空白) ÷ (ε×d) × 10⁶ × V反总 ÷ (V样×T) × V提 ÷ (W×N)

其中，ε：表示消光摩尔系数(ASA在290 nm处摩尔消光系数为2.8 μmol/mL/cm)；d：表示比色皿光径，1 cm；10⁶：表示1 mol=10⁶ μmol；V反总：表示反应体系总体积，1 mL；V样：表示取样量，0.1 mL；T：表示反应时间，2 min；Cpr：表示待测样本蛋白质浓度(mgprot/mL)，需另外测定；V提：表示提取液总体积，mL；W：表示样本鲜重，g；N：表示样本测试前稀释倍数。

存储条件

2～8℃保存，有效期3个月。

COA

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