本试剂盒基于比色法，通过测定340 nm处吸光度的降低来计算苹果酸脱氢酶的活力，适用于动物组织、培养细胞、植物组织、各种水产等的苹果酸脱氢酶（MDH）活性测定。

产品信息

组分信息

备注：

1）试剂二应用液的配制：临用前将1瓶稀释液融化后加入到1支粉剂中，充分混匀后即为试剂二应用液，现用现配。

2）试剂三应用液的配制：临用前将1瓶稀释液融化后加入到1支粉剂中，充分混匀即为试剂三应用液，备用。

3）工作液的配制：按试剂一︰试剂二应用液︰试剂三应用液＝60︰1︰5 的比例进行配制,用多少配制多少，现用现配。

使用说明

1.仪器试剂准备

含340 nm波长的紫外分光光度计、0.5 cm光径石英比色皿、37℃水浴锅、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或 PBS（0.1M）、涡旋混匀器、离心管、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

组织样本：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(mL)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液进行测定。

根据各种组织中MDH活力的不同再用生理盐水按不同的比例将10％的匀浆上清液稀释成0.2％，0.1%等不同的浓度待测。参考匀浆取样浓度：肝脏一般为0.2％；肌肉一般为0.5％。

3.操作步骤

1）将紫外分光光度计于340 nm处，0.5 cm光径石英比色皿，以双蒸水调零(石英比色皿准备两只，一只用于调零，一只用于测定)。

2）将工作液，37℃预温3分钟以上。

3）往相应编号的试管中加入50 μL待测样本，取1 mL工作液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(空白管取50 μL双蒸水，加入1 mL工作液，其它操作与测定相同)

4） 迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度计340 nm处比色，20秒时读取吸光度值(A1值)，在1分20秒时再次测定吸光度值(A2值)。

5）求出2次吸光度差值(△A=A1-A2)。

6）备注：①空白管只须做1～2只(空白OD很稳定)；②若△A测定/分钟＜0.05则需加大样本的浓度；否则影响检测结果；③若△A测定/分钟＞0.3，则需将样本的浓度稀释后再测；否则影响检测结果；④请在批量检测前一定要取正常对照组样本做此样本最佳浓度的预实验。

4.计算公式

MDH活力(U/mgprot) = (△A测定-△A空白) ÷ 6.2 ÷ d × V反总 ÷ V样 ÷ Cpr

其中：6.2：表示底物的微摩尔消光系数；d：表示比色光径，0.5(cm)；V反总：表示反应液总体积，1050(μL)；V样：表示取样量，50(μL)；Cpr：表示匀浆蛋白浓度，mgprot/mL(prot指蛋白)

-25～-15℃保存，有效期6个月。