脂质过氧化物(LPO)测定试剂盒 Lipid Peroxidation Assay Kit（60431ES）

本试剂盒测定原理如下：脂质过氧化物（LPO）在45℃反应60分钟的条件下，一分子脂质过氧化物（LPO）和两分子的显色试剂反应，产生一种稳定的生色团，在586 nm下有最大吸收峰。通过标准曲线对照或公式计算可得到检测物中脂质过氧化物（LPO）的含量。该方法的优点包括快速简便，适用于检测动物血清/浆、组织等样本中的脂质过氧化物（LPO）含量。

产品信息

组分信息

备注：

试剂一应用液配制：将基质贮备液和基质稀释液按3:1体积比混合，现用现配。

使用说明

1.仪器试剂准备

含586 nm波长的酶标仪、96孔板、45℃水浴锅或恒温箱、沸水浴锅、台式低速离心机、各种规格移液器、蒸馏水、涡旋 混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1）组织样本：

准确称取组织重量，按重量(g)：体积(mL)=1:9 的比例加入生理盐水，冰水浴匀浆，2500 转/分，离心10分钟，取上清液检测。

2）血清/浆样本：

直接检测。

3）细胞样本：

贴壁细胞：用细胞刮配合等渗PB刮下或用胰酶消化下来（消化后加入0.5-1 mL等渗PBS冲洗），再将细胞悬液转移到另一离心管中，1000转/分，离心10分钟，弃上清液，留细胞沉淀；用等渗缓冲液（推荐0.1 mol/L 、pH 7～7.4磷酸盐缓冲液）清洗1～2次，同样1000 转/分，离心10分钟，弃上清液，留细胞沉淀（若不立即测定，可直接放-20℃或-80℃冰箱保存，3个月内可用）；往细胞沉淀中加入0.2～0.3 mL的匀浆介质（推荐0.1 mol/L pH 7～7.4的PBS或生理盐水）（加完匀浆介质后轻轻混匀细胞溶液，使其均匀，吸取少量进行细胞计数；若是破碎后可以测蛋白，则不用细胞计数），冰水浴条件下超声破碎(功率：300W,3～5秒/次,间隔 30 秒，重复3～5次)或手动匀浆，制备好的匀浆液若比较均匀可不离心直接测定。也可采用裂解液裂解(推荐TritonX-100，1～2%,浓度0.1-0.2 mL裂解30～40 分钟)，裂解好的液体可不离心直接测定。

[注]：建议细胞数在100 万个以上（越多测定效果越好），破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎完全。

3.操作表

取所需数量的1.5mL带盖的离心管，编号后按下表进行操作：

4.计算公式

1）血清样本计算公式

血清（浆）中LPO含量(μmol/L) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准

2）组织样本计算公式

组织中LPO含量(μmol/gprot) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准/Cpr

3）细胞样本计算公式

细胞中LPO含量(μmol/104个细胞) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × V/细胞数

其中：C标准：表示标准液浓度，10 μmol/L；Cpr：表示匀浆液蛋白浓度，gprot/L（prot指蛋白）；细胞数：表示细胞破碎时的细胞总数，万个；V：表示细胞破碎时加入的匀浆介质的总体积，L。

[注]：细胞样本计算时，也可以用组织样本的计算公式。

2～8℃保存，有效期1年。