实验所用试剂设备清单

货号	产品名称
18801ES	MolPure® PlantPlusDNAKit 多糖多酚植物DNA提取试剂盒
10406ES	RNase A
—	β-巯基乙醇
—	无水乙醇

 

实验前准备

1．自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，β-巯基乙醇、无水乙醇、氯仿或氯仿替代物（19203ES），液氮（组织研磨用），1.5 mL离心管等。

2．所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3．首次使用前，在结合液BD*和漂洗液W*瓶中加入2倍体积和4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入指定体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

 

操作步骤

1．按照样本数量，取5 mL裂解液LB置于65℃预热。使用前，将裂解液LB和102 μL β-巯基乙醇（自备）按照49:1体积比混合。

2．每份样本所需的作用缓冲液量为600 μL。将配制后的作用缓冲液分装至1.5 mL RNase-free离心管中，待用。

3．取50 mg研磨好的粉末，并转移至上述1.5 mL的离心管中。剧烈涡旋振荡，并用移液枪轻柔吹打混匀，瞬离收集管壁液体。

4．加入10 μL RNase A(10 mg/mL)，65℃温浴20 min，每5min颠倒混匀样品3-5次。

5．加入700 µL 氯仿或氯仿替代物（19203ES）（自备），涡旋振荡混匀，12,000 rpm离心10 min。

6．小心移取500 µL上清至新的1.5 mL离心管中。注：避免吸到界面物质。

7．加入750 µL的结合液BD*，立即吹打混匀。注：确保结合液BD*已添加无水乙醇。

8．将DNA吸附柱套入2 mL收集管中，备用。

9．将上述样本预处理液（含沉淀）加入DNA吸附柱中，12,000 rpm离心 1min，弃掉废液。注：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。注：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至5 min。

10．将DNA吸附柱放回收集管中，加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

11．将DNA吸附柱放回收集管中，加入600 µL漂洗液W*，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。 注：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。

12．重复一遍步骤11。

13．将DNA吸附柱放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W*。

14．将DNA吸附柱放入新的1.5 mL离心管中，在吸附柱中央加入100 µL洗脱液，室温放置5 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为DNA溶液。

15．DNA溶液可置于-25~-15℃长期保存。

 

质检结果—DNA浓度和纯度

样本序号	浓度（nanodrop）ng/μL	A260/A280	A260/A230	Qubit（ng/μL）
1	26.735	1.860	2.030	22.6
2	17.839	1.980	1.780	15.3
3	14.035	2.040	1.810	12.7
4	22.250	1.880	2.240	21.4
5	36.248	1.860	2.040	32.8
6	21.814	1.870	2.100	21
7	22.934	1.900	2.050	20.8
8	13.722	1.910	1.330	11

 

质检结果—DNA完整度分析

 

 

数据来源：美国某高校老师

 

实验结论

采用翌圣生物离心柱法多糖多酚植物DNA提取试剂盒（18801ES）提取8个桑叶样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的DNA浓度中桑叶浓度较高，纯度较好，能够满足后续实验要求。