Cas9核酸酶是一种向导RNA (guideRNA, gRNA)引导的核酸内切酶,可催化双链DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基础上进行改造,它在N端包含一个核定位信号(NLS),在C端包含一个EGFP和一个6X (His)序列。当Cas9以NLS序列表达时,Cas9 RNP复合物在进入细胞后立即定位到细胞核。不需要体内转录或翻译,提高了效率。此外,与其他系统相比,EGFP标签可作为追踪或分类转染细胞的报告器,通过荣光激活细胞分选(FACS)富集所需基因组编辑的细胞群。它大大降低了在基因组编辑应用中与单细胞克隆和基因分型相关的人工和成本。

• 含EGFP，不需要另外导入荧光蛋白

A：细胞转染实验：电穿孔后12 h，在荧光显微镜下观察细胞。

B：切割效率检测：线性化质粒的消化效率大于90%。

注：20 μL的反应体系，在含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率大于90%。

图1. NLS-Cas9-EGFP Nuclease细胞转染及体外切割结果

-25~-15℃保存，有效期1年。