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5× Hieff Canace™ PCR Master Mix (for Multiplex PCR)
产品货号:10137ES03
产品规格:1 mL
产品价格:¥1215.00
类别:多重PCR

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  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix高保真PCR预混液(for Multiplex PCR)

    10137ES03

    1 mL

    1215.00

    10137ES08

    5×1 mL

    3065.00

    10137ES25

    25×1 mL

    11165.00

    10137ES76

    500 mL

    178655.00


    产品描述


    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace开发的,针对于高通量测序领域中多重PCR文库构建应用专门优化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品为5×mix PCR混合液,可添加的模板、引物体积范围大,使您的实验更加灵活(本公司另有2×mix可供选择,Cat.10138)。


    产品应用


    多重PCR文库构建。


    质量控制


    核酸外切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA –Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法


    冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。


    注意事项


    1.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    2.值得注意的是,多重PCR建库实验本身具有一定的难度,通常需要进行优化,如您在使用本产品时遇到困难,可联系我们的技术支持,我们有多重优化方案,可帮助您更好的构建实验体系。


    PCR反应体系(推荐冰上配制)


    组分

    体积 μL

    ddH2O

    to 50

    DNA模板

    X

    Primer mix (X μM)

    X

    5×Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    10

    【注】:

    1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

    2引物与模板第一轮多重PCR进行target enrichment其中的引物和模板条件需要自行摸索。

    第二轮多重PCR引物的浓度建议使用:10 μM引物 加2 μL左右。


    第一轮PCR扩增程序:


    循环步骤

    温度(℃)

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    20 sec

    15-45

    退火/延伸

    60℃

    4-10 min

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    【注】

    在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应(设置热盖温度至105℃左右)。

    退火/延伸时间:100重PCR推荐4 min;1000重推荐8-10 min需要自己根据引物情况摸索。


    PCR产物磁珠纯化


    建议在50 μL 反应体系中加45 μL磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。


    第二轮PCR扩增程序:


    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    30 sec

    1

    变性

    98℃

    15 sec

    25-35(可自行优化)

    退火

    60℃

    30 sec

    延伸

    72℃

    1 min

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    【注】退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为30 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。


    PCR产物磁珠纯化


    建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。


    HB190918